地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定.docx

地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定【关键词】地榆；乌索酸；齐墩果酸；高效液相色谱摘要：目的建立地榆药材中乌索酸和齐墩果酸含量的测定方法。方法用高效液相色谱法。色谱柱为NovaPakC18(mm×300mm,4μm),流动相甲醇水；CP225D分析天平；UPWSI10T高纯水机。2试药甲醇，色谱纯；乙醇为分析纯；水为高纯水；乌索酸、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742200314，110709200304，供含量测定用)。地榆药材(市售)，经本所天然药物实验室鉴定为地榆SanguisorbaofficinalisL.的根。2方法与结果乌索酸和齐墩果酸检测波长的确定采用PAD检测器在190~500nm波长范围内扫描，乌索酸和齐墩果酸对照品在流动相中的最大吸收波长均为nm，但在低波长处，流动相有较强的末端吸收，经提取不同波长色谱比对，选取210nm为检测波长，可在有效消除背景干扰时保证基线平稳和检测的灵敏度［5］。图1乌索酸和齐墩果酸对照品的紫外光谱图(略)色谱条件色谱柱：NovaPakC18(mm×300mm，4μm，带保护柱)；流动相：甲醇水；检测波长：210nm；流速：ml/min；柱温：25℃；外标法定量分析，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000。对照品和地榆样品的HPLC色谱见图2。a对照品b地榆样品1齐墩果酸2乌索酸图2对照品和地榆样品的HPLC色谱(略)标准对照品溶液配制精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品mg，齐墩果酸对照品mg置10ml容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，甲醇定容，作为乌索酸和齐墩果酸对照品混合储备溶液。精密吸取混合储备溶液1ml至10ml容量瓶中，加甲醇稀释，定容，制成含乌索酸2μg/μl和齐墩果酸6μg/μl的混合对照品溶液。地榆样品溶液的配制精密称取约5g烘干的地榆，分别加入8倍量乙醇超声提取120min，过滤，滤渣用乙醇洗涤，合并滤液定容至50ml容量瓶中。滤液用微孔滤膜过滤，取续滤液作为样品溶液。线性关系的考察精密吸取对照品混合液1，4，7，10，15μl分别进样分析，平行3次，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积平均值为纵坐标，以进样量(μg)为横坐标进行线性回归，乌索酸回归方程为Y=××104，r=8；齐墩果酸回归方程为Y=××104，r=5，表明当乌索酸进样量在2~μg，齐墩果酸进样量在6~μg之间时，呈良好线性关系。精密度实验精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照品混合液15μl，重复进样5次，乌索酸峰面积相对标准偏差为%，齐墩果酸的峰面积为%。表明进样方法和仪器精密度良好。重现性实验精密称取同一批地榆样品5份，按条件制备样品溶液，精密吸取15μl进样分析，乌索酸峰面积的RSD为%，齐墩果酸峰面积的RSD为%(n=5)，方法重现性良好。加样回收率实验精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的地榆样品，分别加入乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液适量，制备地榆加标样品溶液。进样测定乌索酸和齐墩果酸的含量，计算回收率。乌索酸和齐墩果酸的平均加样回收率分别为%和%。样品含量的测定取不同批次地榆样品超声醇提溶液在上述色谱条件下进样，测定峰面积，平行3次，按外标法计算乌索酸和齐墩果酸平均含量，结果见表1。表1地榆中乌索酸和齐墩果酸的含量(略)［1］中药大辞海编写组.中药大辞海［M］.北京：中国医药科学出版社，1993：1962.［2］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科技出版社，1986：806.［3］曹爱民，张东方，沙明，等.地榆中皂苷类化合物分离、鉴定及其含量测定［J］.中草药，2003，34(5):397.［4］原春兰，李宗孝，杨佩云.地榆中熊果酸的提取［J］.中国医药工业杂志，2002，33(10):478.［5］邹盛勤，陈武.枇杷叶及其药渣中醇提成分含量的比较［J］.中国药房，2005，16(24):1916.