采用超高效液相色谱-串联质谱法测定乌洛托品含量.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106596742A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201510665913.X(22)申请日2015.10.16(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人洪霞张淑雅刘静(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称采用超高效液相色谱-串联质谱法测定乌洛托品含量(57)摘要本发明属于食品学检验领域。具体涉及乌洛托品含量的测定方法。该方法用乙腈提取腐竹中的乌洛托品，经固相萃取柱PXA净化，用UPLC－MS/MS分析，采用多反应监测模式，外标法定量。色谱测定条件为色谱柱ACQUITYUPLCBEHHILIC,2.1×50mm，1.7μm；流动相：A为10mmol/L乙酸铵溶液，B为乙腈；流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。对样品进行3个添加剂量水平的回收率试验，加标回收率在81.67%～101.67%，其多次测定的ＲSD在1.84%～3.99%，方法的准确度和精密度满足分析要求。说明该方法操作简单快捷，准确度和稳定性好。应用该法检测了市场和商超6个不同品牌的腐竹产品，均未发现有乌洛托品的残留。结果表明最低检出限为1μg/L，可直接判断样品是否超标，此方法对于腐竹中的乌洛托品的检测监控方面具有重要意义。CN106596742ACN106596742A权利要求书1/1页1.乌洛托品含量的测定方法，其特征在于将待测样品预处理后，用超高效液相色谱-串联质谱法检测，包括以下步骤：（1）样品预处理称取1.0g腐竹(精确至0.01g)(已粉碎均匀)和1.0g无水硫酸钠于聚四氟乙烯离心管中，加入10mL乙腈溶液，涡旋混合2min，超声10min，10000r/min离心10min，取上清液待净化；将PXA小柱用5mL乙腈活化，将上清液加入柱中，收集流出液，再加入1mL乙腈，收集流出液，合并流出液，用N2吹干，用90∶10的乙腈：水溶解定容至1mL，涡旋混匀；过0.22μm滤膜,待上机使用；（2）上机测定用超高效液相色谱－串联质谱检测，记录色谱图，内标峰高（Hi）与乌洛托品峰高（Hs），用标准曲线换算浓度；前述的乌洛托品残留量的测定方法，其特征在于该方法是以BEHHILIC为色谱柱，以乙酸铵溶液、乙腈为流动相A、流动相B，流速0.3mL/min；柱温为40℃；进样量为10µL；检测波长为229nm。2.本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱－串联质谱法检测腐竹中的乌洛托品含量具有较好的准确度与精密度。2CN106596742A说明书1/3页采用超高效液相色谱-串联质谱法测定乌洛托品含量技术领域[0001]本发明属于食品学检验领域。具体涉及乌洛托品含量的测定方法。背景技术[0002]腐竹是一种人们喜爱的传统豆制品，但是其保存周期很短，为了使腐竹外表光鲜、保质期长，一些不法厂家在生产的过程中常非法添加硼砂和吊白块，经过多年的专项治理整顿，已经鲜少见到，但是他们的添加手法和技术也日趋先进和隐蔽，目前监管部门已经发现乌洛托品已经作为吊白块的替代品添加到腐竹中。[0003]乌洛托品(urotropine)，又名六亚甲基四胺(hexamethylenetetramine)，本身是属于低毒类，常应用于医药和工业上。作为非法添加物，它主要起到防腐，增白，改善产品外观的作用，其原理在于乌洛托品在酸性条件下可以分解产生甲醛，对人体的肾、肝、中枢神经、免疫功能、消化系统等均有损害，严禁用于食品或食品加工过程中。目前，我国还没有检测腐竹中乌洛托品的标准，仅有行业标准SN/T2226－2008应用于鸡肉、鸡肝脏、鸡肾脏和猪肉中乌洛托品的检测［1］。相关文献报道应用于腐竹中的检测目前已有少数报道，有激光拉曼光谱法［2］、气相色谱法［3－4］、液相色谱法［5］和液质联用法等方法［6－7］，因此开展相关检测工作很有意义。本文建立了腐竹的超高效液相色谱及串联质谱方法，此方法的开发，可大大减少样品分析时间。发明内容[0004]高效液相色谱是利用高压输液泵驱使流动相通过装填固定相的色谱柱，由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相中的滞留时间不同，从而按照先后顺序从固定相中流出，达到对物质进行分离的效果，并进行定量分析和定性分析的方法。[0005]本发明包括以下步骤：（1）样品预处理称取1.0g腐竹(精确至0.01g)(已粉碎均匀)和1.0g无水硫酸钠于聚四氟乙烯离心管中，加入10mL乙腈溶液，涡旋混合2min，超声10min，10000r/min离心10min，