还原糖含量的测定.ppt

实验六还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）目的原理在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS）共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线并计算，就可以分别求出样品中还原糖和总糖的含量。管号将以上各管上下颠倒几次使溶液混匀后，按顺序倒入比色杯中，在540nm波长条件下进行比色测定：用0号管溶液调零点，分别记录各管吸光值；然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制出标准曲线。2、测定样品中还原糖和总糖含量。（1）提取样品中的还原糖：准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml蒸馏水，摇匀，置于50℃水浴条件下20分钟，使还原糖浸出；在4000rpm、5分钟条件下进行离心，得到的上清液倒入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，上下颠倒几次将溶液混匀，作为还原糖待测液。（2）提取样品中的总糖：准确称取0.1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加入10ml6mol/LHCl及15ml蒸馏水，沸水浴30分钟（注意不能把水烧干）。用滴管吸取1~2滴水解液于白瓷板上，加1滴I-KI溶液，如显示出蓝色说明水解不完全，可适当延长沸水浴时间；若不显蓝色，则说明水解完全。待水解液冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，在4000rpm、5分钟条件下离心，得到的上清液转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，上下颠倒几次混匀溶液，作为总糖待测液。（3）显色和比色，按下表操作结果处理注意事项