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豆浆中还原糖含量的测定 葡萄糖分子中航油游离醛基,果糖分子中含有游离酮基,乳糖和麦芽糖分子中含有游离的半缩醛羟基,因此它们具有还原性,是还原糖。其他非还原糖,如常见的蔗糖、糊精淀粉等,它们本身不具有还原性,但可以通过水解反应成具有还原性的单糖,再进行测定,然后换算成样品中的相应的糖类的含量。所以还原糖的测定为糖类的测定的基础。 测豆浆中还原糖含量的两种方法有3,5-二硝基水杨酸法操作简便,快速,杂质干扰较少;费林试剂法操作复杂,易受人为、主观因素影响,可靠性差。故测定豆浆中还原糖应以水杨酸法较为适合。 实验原理 3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系,利用比色法可测知样品的含糖量。 试剂与仪器 ①3,5-二硝基水杨酸试剂(又称DNS试剂): 甲液:溶解6.9g结晶酚于15.2mL1O%氢氧化钠中,并稀释至69mL,在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。 乙液:称取255g酒石酸钠,加到300mL10%氢氧化钠中,再加入880mL1%3,5-二硝基水杨酸溶液。 将甲液与乙液相混合即得黄色试剂,贮于棕色试剂瓶中。在室温下,放置7—10天以后使用。 ②葡萄糖标准液:准确称取干燥至恒重的分析纯葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100mL即含葡萄糖为1.0mg/ml冰箱保存备用。 ③乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌,加3ml冰乙酸并稀释至1000ml。 ④106g/L亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾,溶于水中,稀释至100ml。 ⑤过滤装置 ⑥电热恒温水浴 ⑦721分光光度计 实验步骤 葡萄糖标准曲线制作 取葡萄糖标准溶液(1mg/ml)0-0.8mL分别放入试管中,均用蒸馏水稀释至1ml,加入1mlDNS试剂,在沸水浴中加热5min,取出 以自来水冷却,再加入蒸馏水8mL混匀,在波长520nm下,以1cm比色杯测定各管光密度(空白管溶液调零),以葡萄糖含量(mg)为横坐标,相应各管光密度值为纵坐标绘制标准曲线。 样品的预处理 取豆浆30ml置于100ml容量瓶中,边摇边慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾溶液,加水至刻度,摇匀。静置30min。用滤纸过滤,收集滤液备用。注意:乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等,使它们形成沉淀,经过滤除去。 样品中还原糖含量的测定 将豆浆过滤,取滤液1ml,加入1mlDNS试剂,在沸水浴中加热5min,取出以自来水冷却,再加入蒸馏水8ml混匀,在波长520nm下,测定样品吸光度。查标准曲线即可计算出还原糖的含量。 ④按下式计算出样品中还原糖的百分含量: 式中:X—查标准曲线所得待测样品液中还原糖量(mg); V样—样品液体积(ml); V—稀释后的样品液总体积(ml) V1—待测样品液的体积(ml) 参考文献 [1]黄伟坤,食品分析与检验,轻工业出版社,1997 [2]S.SuzanneNielsen,杨严俊译,食品分析(第二版),轻工业出版社,2002 [3]周素珊、黄尔义、刘志杰,豆浆中还原糖成分的检测与分析,《福建农林》第3期,2006