基因工程获取目的基因培训课件.ppt
胜利****实阿
亲,该文档总共22页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~
相关资料
基因工程获取目的基因培训课件.ppt
基因工程获取目的基因一、目的基因的获取一、目的基因的获取依据:目的基因的有关信息。如:根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性2、利用PCR技术扩增目的基因参与的组分DNA聚合酶的特性①3’DNA分子的热变性原理高温解决了打开双链的问题,但是,又导致DNA聚合酶失活的问题,耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题,促成了PCR技术的自动化。PCR反应的条件1、PCR的反应步骤950C变性②DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物
基因工程获取目的基因专家讲座.pptx
一、目标基因获取一、目标基因获取一、目标基因获取依据:目标基因相关信息。如:依据基因核苷酸序列基因功效基因在染色体上位置基因转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特征2、利用PCR技术扩增目标基因参加组分DNA聚合酶特征①3’DNA分子热变性原理高温处理了打开双链问题,不过,又造成DNA聚合酶失活问题,耐高温TaqDNA聚合酶处理了高温造成DNA聚合酶失活问题,促成了PCR技术自动化。PCR反应条件1、PCR反应步骤950C变性②DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间DNA序列,使这段固定长度序列呈指
基因工程目的基因的获取优品文档.ppt
基因工程目的基因的获取第四章目的基因的获取第四章目的基因的获取第一节基因组DNA片断化第一节基因组DNA片断化由于带有粘性末端,产物可以直接与载体连接。二、随机片断化1)4bp的内切酶2.机械切割法第二节化学合成目的基因第二节化学合成目的基因①保护dNTP的5’端-OH或3’端P研究某个基因,或者要克隆某个基因用于生产大量DNA和蛋白质分子,首先都要把它从庞大的基因组中分离出来。在测序胶上,每组扩出50-100条长度为100-500bp的带。f:fragment大小~20Kb外源DNA片段与探针碱基互补的
PCR法获取目的基因培训课件.ppt
目录DNA,生命的蓝图PCR技术一、PCR技术的创建KaryB.Mullis(1944-)DNA聚合酶1983年Mullis的构思TaqDNA聚合酶(thermusaquaticus,水生栖热菌)二、PCR技术的原理1PCR原理(1)类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于寡核苷酸引物(2)PCR过程:由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成①变性:94℃左右,使双链DNA模板解离成为单链;②复性:55℃左右,引物与模板DNA单链互补配对结合;③延伸:72℃左右,“模板-引物结合物”在DNA聚合酶作用
基因工程基本流程获取目的基因优品文档.ppt
基因工程基本流程获取目的基因鸟枪法(shotgun)鸟枪法基本程序第四步,氧化作用(oxidation)。一个文库要包含99%的基因组DNA时所需要的克隆数目。第二步,偶联反应(coupling)。可得到10-30kb的随机片断。第二步,偶联反应(coupling)。(2)构建基因文库的载体选用在基因组文库的构建过程中,严禁外源DNA片段之间的连接。mRNA只占总RNA的1%-2%。再同不表达A蛋白的总mRNA杂交成cDNA-mRNA双链。这也就是为何我们称这种寡核苷酸合成法为磷酸三酯法的原因。如果已知目