一种用于二乙酰精胺(DAS)检测的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105527434A(43)申请公布日2016.04.27(21)申请号201511020936.1(22)申请日2015.12.31(71)申请人辽宁迈迪生物科技有限公司地址117004辽宁省本溪市本溪经济开发区香槐路166栋(72)发明人李文欣朱明光刘峰宫晓丽王帅(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002代理人李颖周秀梅(51)Int.Cl.G01N33/574(2006.01)权利要求书2页说明书14页附图1页(54)发明名称一种用于二乙酰精胺(DAS)检测的试剂盒(57)摘要本发明涉及检测二乙酰精胺(N1,N12-Diacetylspermine,简称DAS)含量的方法，具体的说是一种用于二乙酰精胺(DAS)含量检测的试剂盒，试剂盒使用的抗原、抗体的制备方法以及试剂盒的研制方法和制备方案。本发明试剂盒优化了DAS含量检测方法，与传统ELISA方法相比，具有操作简便、检测速度快、精密度高、重复性好、检测结果不受操作影响、可大批量样本测试使用等优势。CN105527434ACN105527434A权利要求书1/2页1.一种二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，包括R1试剂，R2试剂，标准品和质控品，其特征在于：所述R1试剂为将二乙酰精胺抗体偶联在纳米颗粒上，并添加保护液后，以液体形态或者冻干后的固定形态保存的试剂；所述的R2试剂为将乙酰精胺(DAS)分子通过偶联试剂偶联在载体蛋白上，以液体形态或者冻干后的固体形态保存的试剂。2.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述二乙酰精胺抗体是以乙酰精胺(DAS)分子通过偶联试剂偶联在载体蛋白上所得的产物作为免疫原，免疫动物得多克隆抗体或经筛选得单克隆抗体。3.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述R1中保护液按重量百分比计为：0.1-0.5％的Tris、0.5-2％的PVP40、0.5-1％的BSA、0.1-0.5％的PEG20000、2-5％的蔗糖、0.01-0.8％的TWEEN20、0.02-0.1％的叠氮钠、0.85-1.5％的NaCl、1-4％的PEG6000，余量为水。4.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述偶联试剂为碳二亚酰胺类或马来酰亚胺类；其中，碳二亚酰胺类为EDC,1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺酯类(NHS酯)；马来酰亚胺类为4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯(GMBS)或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)。5.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)作为偶联试剂，将活化处理后的载体蛋白加入至过量的0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中，再加入水溶性的碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀至清澈透明，而后室温下静置15-30分钟；静置后加入过量的乙酰精胺，混匀至清澈透明，调节体系PH值调至10-12，室温下反应4-6小时；反应后经透析所得产物，即得二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白。6.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)作为偶联试剂，将活化处理后的载体蛋白加入至过量的0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中，再加入水溶性的碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀至清澈透明，而后室温下静置15-30分钟；静置后加入精胺，混匀至清澈透明，调节体系PH值调至10-12，室温下反应4-6小时；反应后经透析所得产物在2-8℃中，向反应体系内加入酰化剂，而后再于2-8℃下反应1-3小时，反应物经透析即得二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白。7.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧]琥珀酰亚胺酯(GMBS)作为偶联试剂，将酰化剂(乙酸酐或无水乙酸或乙酰氯)与精胺在2-8℃下反应60-90min，反应后与偶联剂(GMBS)在0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中混合，室温下反应3-4小时，得乙酰精胺-GMBS偶联产物；将载体蛋白与乙酰巯基琥珀酸在0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中混合，室温下反应3-5小时；反应后加入0.1M