一种用于检测HIV的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109613240A(43)申请公布日2019.04.12(21)申请号201910006772.9(22)申请日2019.01.04(71)申请人广东菲鹏生物有限公司地址523000广东省东莞市松山湖高新技术产业开发区花莲路5号1号厂房7楼(72)发明人于秀玲李瑞净潘少丽欧阳岁燕龚航池朗山武云波陈一尘程珍珠黄荣生(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人赵丽娜(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书2页说明书14页序列表6页(54)发明名称一种用于检测HIV的试剂盒(57)摘要本发明涉及分子检测领域，具体而言，涉及一种用于检测HIV的试剂盒。一种用于检测HIV的试剂盒，包括固相支持物包被的抗原、生物素标记的抗原、亲和素与吖啶酯结合物中的任一种或多种；和/或固相支持物包被的抗体、生物素标记的抗体、亲和素与吖啶酯结合物中的任一种或多种；所述试剂盒以“固相支持物包被的抗原-待检测抗体-生物素标记的抗原-亲和素与吖啶酯结合物”形式和/或以“固相支持物包被的抗体-待检测抗原-生物素标记的抗体-亲和素与吖啶酯结合物”形式完成检测。本发明的试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性优异、测试范围宽、检测自动化程度高等优点。CN109613240ACN109613240A权利要求书1/2页1.用于检测HIV的抗原基因序列，其特征在于，如SEQIDNO.1-4所示。2.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求1所述的抗原基因序列。3.一种转化体，其特征在于，含有权利要求2所述的表达载体的宿主；进一步地，所述宿主为原核生物；进一步地，所述原核生物为大肠杆菌或枯草杆菌。4.用于检测HIV的抗原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.5-8所示。5.用于检测HIV的抗原蛋白，其特征在于，由权利要求1所述的抗原基因序列表达得到；进一步地，所述表达为原核表达。6.一种用于检测HIV的试剂盒，其特征在于，包括固相支持物包被的抗原、生物素标记的抗原、亲和素与吖啶酯结合物；和/或固相支持物包被的抗体、生物素标记的抗体、亲和素与吖啶酯结合物；所述试剂盒以“固相支持物包被的抗原-待检测抗体-生物素标记的抗原-亲和素与吖啶酯结合物”形式和/或以“固相支持物包被的抗体-待检测抗原-生物素标记的抗体-亲和素与吖啶酯结合物”形式完成检测；进一步地，所述固相支持物包被的抗原包括SEQIDNO.1-2所示的序列原核表达的蛋白中的任一种或两种；所述生物素标记的抗原包括SEQIDNO.3-4所示的序列原核表达的蛋白中的任一种或两种；所述固相支持物包被的抗体来自杂交瘤细胞株P24-3B9产生的抗体；所述生物素标记的抗体来自杂交瘤细胞株P24-2F4产生的抗体；其中，SEQIDNO.1与SEQIDNO.3所示的序列原核表达的抗原配对使用；SEQIDNO.2与SEQIDNO.4所示的序列原核表达的抗原配对使用。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述固相支持物为磁珠；进一步地，所述磁珠包被抗原或抗体采用EDC进行偶联；进一步地，所述偶联在活化缓冲液中进行，所述活化缓冲液为MES缓冲液，所述MES缓冲液的浓度为50±5mM，pH为5.5±0.1；进一步地，所述偶联步骤如下：抗原或抗体透析至活化缓冲液中，得到第一溶液；磁珠用活化缓冲液进行分散，得到磁珠分散液；所述磁珠分散液与EDC的活化缓冲液混合，磁分离，去上清，加入所述第一溶液，结合反应后，弃上清，经洗涤、封闭、洗涤，即得；进一步地，所述磁珠分散前还用所述活化缓冲液进行洗涤；进一步地，所述磁珠在活化缓冲液中的浓度为10±2mg/mL；进一步地，所述EDC的活化缓冲液在，EDC的浓度为10±1mg/mL；进一步地，所述EDC溶解于所述活化缓冲液的温度为2-8℃；进一步地，磁珠分散液与EDC的活化缓冲液的体积比为4-6:1；进一步地，所述混合为室温下以转速为30±2rpm旋转30-60min；进一步地，所述结合反应采用室温下以转速为30±2rpm旋转结合30±2min；2CN109613240A权利要求书2/2页进一步地，所述结合反应中，抗原或抗体的浓度为1±0.1mg/mL；进一步地，所述抗原或抗体和EDC的质量比例为1:1±0.1；进一步地，所述磁珠的羧基含量与EDC的摩尔比例在1:10-20。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述亲和素为链霉素；进一步地，所述亲和素与所述吖啶酯偶联的中间物质为BSA；进一步地，先通过侨联工艺将所述BSA偶联到吖啶酯上；进一步地，所述BSA与所述吖啶酯的质量比例为2-3:1；进一步地，所述BSA