一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108226483A(43)申请公布日2018.06.29(21)申请号201810052604.9(22)申请日2018.01.19(71)申请人辽宁迈迪生物科技股份有限公司地址117000辽宁省本溪市经济开发区香槐路166栋(72)发明人李文欣刘峰(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人李佳(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/569(2006.01)G01N33/50(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用，属于医学检验领域。本发明提供的DAS检测试剂盒的制备方法，能通过简单的制备步骤和常见的试剂，快速的制备出检测DAS的检测试剂盒，通过该制备方法制备的检测试剂盒，具有检测灵敏度高、特异性强的特点，DAS的检测试剂盒应用到检测DAS中，可以得到较为精确的结果，可以有效的避免漏检和误检。CN108226483ACN108226483A权利要求书1/1页1.一种DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述DAS检测试剂盒的制备方法包括制备第一检测试剂、第二检测试剂和显色试剂；将3-6mL浓度为1-3mg/mL的DAS抗体溶液与0.8-1.5mL1×PBS混合缓冲液混合，并加入浓度为0.8-1.1mol/L的乙二胺溶液，经过透析得到浓度为0.8-1.3mg/mL的DAS抗体乙二胺溶液，由所述DAS抗体乙二胺溶液与NSP-SA-NHS/DMF溶液混合反应加入pH为8.3-8.6的碳酸盐混合缓冲液，制得DAS-Ab-NSP溶液，将所述DAS-Ab-NSP溶液制成所述第一检测试剂；将质量分数为2.1％-2.7％的羧基磁性微球液用柠檬酸缓冲液稀释，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合，用pH＝5.5的柠檬酸缓冲液悬浮，制成微球悬浮液，将所述微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合沉淀并去上清，得到沉淀产物，将所述沉淀产物加入含有0.1％的BSA的9-14mmol/L的PBS溶液制成所述第二检测试剂；所述显色试剂包括第一显色剂和第二显色剂；所述第一显色剂主要由0.07mol/L-0.12mol/L的HNO3溶液和质量分数为0.08％-0.12％H2O2溶液制得；所述第二显色剂主要由0.2mol/L-0.29mol/L的NaOH溶液、体积分数0.8％-1.2％TWEEN20溶液和体积分数为0.8％-1.2％TritonX-100溶液制得。2.根据权利要求1所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述1×PBS混合缓冲液主要由17mg-20mg的EDC和2.7mg-4.1mg的NHS溶解于1mL的1×PBS溶液制得。3.根据权利要求1所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述乙二胺溶液由1mL的1×PBS溶液稀释乙二胺得到。4.根据权利要求3所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述NSP-SA-NHS/DMF溶液由二甲基甲酰胺稀释NSP-SA-NHS得到，所述NSP-SA-NHS/DMF溶液的浓度为1.7mg/mL-2.1mg/mL。5.根据权利要求4所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，将所述DAS-Ab-NSP溶液制成所述第一检测试剂前还包括透析所述DAS-Ab-NSP溶液，透析液为0.1mol/L，pH＝6.3的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液含有体积分数为0.1‰-0.5‰的proclin300；所述碳酸盐混合缓冲液含有体积分数为10％的赖氨酸和体积分数为5％的BSA溶液。6.根据权利要求1所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，加入所述含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合前还包括加入质量分数为8％-11％的EDC溶液，避光保存12-19min；再加入所述EDC溶液室温保存8-15min；所述EDC溶液由EDC溶解于pH＝5.5的所述柠檬酸缓冲液制得。7.根据权利要求6所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述单乙酰精胺溶液由单乙酰精胺溶解于pH＝5.5的柠檬酸缓冲液制得。8.根据权利要求7所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，将所述微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合前，所述微球悬浮液中还加入有16-20mg的所述EDC和3.1-3.9mg的所述NHS。9.一种DAS检测试剂盒，其特征在于，所述DAS检测试剂盒由如权利要求1-8任一项所述的DAS检测试剂盒的制备方法制得。10.如权利要求9所述的DAS检测试剂盒在DAS检测中的应用。2CN108226483A说明书1/10页一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉