一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110079583A(43)申请公布日2019.08.02(21)申请号201910447081.2(22)申请日2019.05.27(71)申请人重庆博艾迈迪森生物科技有限公司地址400020重庆市江北区海尔路319号4-9-88（两路寸滩保税港区）(72)发明人申友锋徐建(74)专利代理机构重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙)50217代理人成艳(51)Int.Cl.C12Q1/6804(2018.01)权利要求书2页说明书16页序列表5页附图4页(54)发明名称一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于生物医药领域，涉及一种分子检测方法，具体涉及一种核酸的免疫层析检测方法、检测试剂盒及其应用。本检测方法使用报告探针标记目的DNA片段，使用固定化的捕获探针结合被报告探针标记的所述目的DNA片段；所述报告探针和所述捕获探针均包含TALE蛋白，或者仅有报告探针包含TALE蛋白，或者仅有捕获探针包含TALE蛋白。该检测方法利用DNA序列特异性识别蛋白结合双链DNA，从而减少了检测前的DNA变性等复杂操作，缩短了核酸检测的时间并简化了检测操作。本技术方案可以应用到生物样品检验和疾病检测相关试剂盒的制备中。CN110079583ACN110079583A权利要求书1/2页1.一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，使用报告探针标记目的DNA片段，使用固定化的捕获探针结合报告探针标记的所述目的DNA片段；所述报告探针和所述捕获探针均包含TALE蛋白，或者仅有报告探针包含TALE蛋白，或者仅有捕获探针包含TALE蛋白。2.根据权利要求1所述的一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，所述核酸检测方法依次包括以下步骤：步骤(1)报告探针的制备：将TALE蛋白连接到胶体金颗粒上，得报告探针；步骤(2)捕获探针的制备：将TALE蛋白固定在固相支持物上，得捕获探针；步骤(3)标记目的DNA片段：将核酸样本与报告探针接触，形成核酸样本-报告探针混合物，所述核酸样本为从待测样品中抽提得到的总核酸，目的DNA片段位于核酸样本中；以及，步骤(4)检测目的DNA片段：将核酸样本-报告探针混合物与捕获探针接触。3.根据权利要求1所述的一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，所述核酸检测方法依次包括以下步骤：步骤(1)探针制备：所述报告探针由TALE蛋白连接胶体金颗粒制成、并且所述捕获探针由配体结合蛋白固定在固相支持物上制成，或者所述报告探针由配体结合蛋白连接胶体金颗粒制成、并且所述捕获探针由TALE蛋白固定在固相支持物上制成；步骤(2)连接配体：在目的DNA片段上连接配体，所述目的DNA片段位于核酸样本中，得配体-核酸样本，所述配体用于结合配体结合蛋白，所述核酸样本为从待测样品中抽提得到的总核酸。步骤(3)标记目的DNA片段：将配体-核酸样本与报告探针接触，形成配体-核酸样本-报告探针混合物；以及，步骤(4)检测目的DNA片段：将配体-核酸样本-报告探针混合物与捕获探针接触。4.根据权利要求3所述的一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，所述配体-核酸样本由如下方法制备而成：将所述核酸样本加入到核酸体外扩增体系中，所述核酸体外扩增体系包括与配体连接的上游引物和与配体连接的下游引物；对核酸样本中的目的DNA片段进行体外扩增后，得所述配体-核酸样本。5.根据权利要求4所述的一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，所述配体为生物素，所述配体结合蛋白为亲和素；所述核酸体外扩增体系为PCR、qPCR、RPA、RAA或LAMP。6.根据权利要求2-5中任一项权利要求所述的一种核酸的免疫层析检测方法，其特征在于，所述固相支持物为硝酸纤维膜、玻璃纤维膜或尼龙膜；所述报告探针包被在玻璃纤维膜中。7.根据权利要求2所述检测方法的核酸检测试剂盒，其特征在于，包括核酸提取单元和可视化检测单元；所述可视化检测单元包括依次固定在底板上的以下各部分：样品垫：用于承接样品；结合垫：所述结合垫的材质为玻璃纤维膜，报告探针包被在玻璃纤维膜中，所述报告探针为TALE蛋白-胶体金颗粒连接物；固相支持物：TALE蛋白固定在固相支持物上形成捕获探针，所述固相支持物为硝酸纤维膜、玻璃纤维膜或尼龙膜；吸水垫：由吸水材料制成。2CN110079583A权利要求书2/2页8.根据权利要求3所述检测方法的核酸检测试剂盒，其特征在于，包括核酸提取单元、核酸体外扩增单元和可视化检测单元；所述可视化检测单元包括依次固定在底板上的以下各部分：样品垫：用于承接样品；结合垫：所述结合垫的材质为玻璃纤维膜，报告探针包被在玻璃纤维膜中；固相支持物：固定化的捕获探针位于固相支持物上，所述固相支持物为硝酸纤维膜、玻璃纤维膜或尼