一种免疫层析试纸条及免疫层析检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108226466A(43)申请公布日2018.06.29(21)申请号201711250475.6(22)申请日2017.12.01(71)申请人郑乐民地址350015福建省福州市马尾区湖里路27号1#楼2-33B室（自贸试验区内）申请人福建普立辰生物技术有限公司(72)发明人郑乐民段学军赵明明刘昌杰何萌萌路美玲彭明辉李瑶(74)专利代理机构北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)11447代理人耿超王浩然(51)Int.Cl.G01N33/533(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称一种免疫层析试纸条及免疫层析检测方法(57)摘要本公开涉及一种免疫层析试纸条及免疫层析检测方法，该试纸条包括依次相连接的样品垫、标记垫、基膜和吸水垫；所述基膜上依次设置校准线C1线、校准线C2线和测试T线，所述C1线和C2线上分别包被浓度不同的校准物；所述标记垫上含有荧光标记的第一单克隆抗体；所述T线上包被有多克隆抗体；其中，所述C1线和C2线上分别包被不同浓度的校准物，所述校准物为能够捕获所述第一单克隆抗体的物质。本公开所提供的纸条和方法，通过利用两条校准线C1和C2，获得能够与检测信号定量比较的校准信号并建立校正方程，从而在每次检测中都对T线的检测结果进行校准，相比于仅有一条主校准线的普通免疫层析试纸，获得的定量数据更加准确可信。CN108226466ACN108226466A权利要求书1/2页1.一种免疫层析试纸条，该免疫层析试纸条包括依次相连接的样品垫、标记垫、基膜和吸水垫；其特征在于，所述基膜上依次设置校准线C1线、校准线C2线和测试T线，所述C1线和C2线上分别包被浓度不同的校准物；所述标记垫上含有荧光标记的第一单克隆抗体；所述T线上包被有多克隆抗体；其中，所述校准物为能够捕获所述第一单克隆抗体的物质。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其中，C1线上包被的校准物是由浓度为10-40ng/mL的校准物溶液1以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C1线上干燥后得到的，所述C2线上包被的校准物是由浓度为50-100ng/mL的校准物溶液2以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C2线上干燥后得到的。3.根据权利要求1或2所述的免疫层析试纸条，其中，所述校准物为第一单克隆抗体的抗原或抗体。4.根据权利要求3所述的免疫层析试纸条，其中，所述荧光标记的第一单克隆抗体是按照以下方法制备的：将抗体与荧光微球按照1-4：300的质量比在pH为8.0-8.5的反应缓冲液中结合反应20-40min获得荧光标记的第一单克隆抗体；其中，所述荧光微球表面具有羟基官能团；所述反应缓冲液是含有BSA和带氨基基团的烷基硅氧烷的硼酸盐缓冲液，所述反应缓冲液中，所述BSA的质量体积比浓度为9-11％，所述带氨基基团的烷基硅氧烷的质量体积比浓度为0.8-1.2％。5.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其中，所述带氨基基团的烷基硅氧烷为(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷、(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷和(3-氨基丙基)二甲基甲氧硅烷中的至少一种；所述荧光微球为聚苯乙烯包埋镧系元素微球、聚乙烯包埋量子点微球或聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球。6.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其中，在所述反应缓冲液中，抗体的用量按质量体积比计为1.5-2％。7.根据权利要求1-3和6中任意一项所述的免疫层析试纸条，其中，所述T线上包被的多克隆抗体是由浓度为0.2-2mg/mL的多克隆抗体溶液以0.2-4μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在T线上干燥后得到的。8.根据权利要求7所述的免疫层析试纸条，其中，所述待测样品为胰蛋白酶原2。9.一种免疫层析检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：主校准曲线的绘制：将待检测物的标准品配制成梯度浓度的标准品溶液，利用权利要求1-8中任意一项所述的免疫层析试纸条对标准品溶液进行检测，收集免疫层析试纸上T线、C1线和C2线处的荧光曲线峰积分面积值，以T线的荧光曲线峰积分面积值作为纵坐标y，以标准品溶液的浓度值做为横坐标x，绘制主校准曲线并获得主校准方程y＝f1(x)；校正方程：将C1线上包被的校准物的浓度XC1代入所述主校准方程得到yC1，将C2线上包被的校准物的浓度XC2代入所述主校准曲线得到yC2；分别收集C1线和C2线的荧光曲线峰积分面积值YC1和YC2，利用YC1和YC2与上述的yC1和yC2建立校正方程：Y＝f2(x)＝(YC2-YC1)×y/(yC2-yC1)+(YC2×yC1-YC1×yC2)/(yC1-yC2)；2CN108226466A权利要求书2/2页其中，Y为检测样本时T线的荧光曲线峰积分面积值