一种核酸的检测试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114107446A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111547220.2(22)申请日2021.12.16(71)申请人福建和瑞基因科技有限公司地址350000福建省福州市长乐市数字福建产业园东湖路33号7号研发楼申请人北京和瑞精湛医学检验实验室有限公司(72)发明人王岩林明芳王源舒杨浩江宁王寅吴琳(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463代理人宋南(51)Int.Cl.C12Q1/6837(2018.01)权利要求书2页说明书14页序列表2页附图8页(54)发明名称一种核酸的检测试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了一种核酸的检测试剂盒及其检测方法，涉及核酸检测技术领域，本发明通过将8～150nt的多聚核苷酸和能够与目标核酸反向互补的核酸序列相连，形成用于捕获样本中特定RNA的捕获探针。较常规的探针捕获法，本发明能够在无需进行总RNA的提取下，直接对样本中的特定的目标核酸进行捕获分离并检测。本发明不受样本类型限制，可以减少检测成本，简化建库操作，同时也提高了特定RNA的检测效率和稳定性。CN114107446ACN114107446A权利要求书1/2页1.一种核酸的检测方法，其特征在于，其包括：将捕获探针组合与待测样本混合杂交，以实现对样本中的目标核酸的捕获，并对捕获后的目标核酸进行测序检测或PCR检测；其中，所述捕获探针组合包括捕获探针以及固相载体；所述捕获探针为单链核酸序列，包括有第一序列和第二序列；所述第一序列为具有介导与所述固相载体结合的多聚核苷酸，长度为8～150nt；所述第二序列为能够与目标核酸序列反向互补的碱基序列。2.根据权利要求1所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述多聚核苷酸选自polyA、polyT、polyC和polyG中的任意一种；优选地，所述第一序列的长度为8～150nt；优选地，所述第一序列的长度为20～50nt；优选地，在所述捕获探针的序列中，所述第一序列位于所述第二序列的3’端和/或5’端。3.根据权利要求1所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述第二序列的长度为10～120nt；优选地，所述第二序列的长度为40～60nt。4.根据权利要求1所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述固相载体选自有磁珠、硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、凝胶微珠和微孔板中的至少一种；优选地，当所述固相载体为磁珠时，所述磁珠为oligodN磁珠，N选自A、T、C和G中的任意一种。5.根据权利要求1～4任一项所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述捕获探针组合与待测样本的混合方式为：先将所述捕获探针与待测样本混合，使得所述捕获探针上的第二序列识别并结合所述目标核酸，形成捕获探针‑目标核酸杂交体；将所述捕获探针‑目标核酸杂交体与所述固相载体混合杂交；优选地，在将待测样本与捕获探针混合前，所述检测方法还包括：将待测样本、提取液和蛋白酶K混合，进行样本的裂解、稀释和纯化。6.根据权利要求1～4任一项所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述目标核酸为长度≥50nt的RNA；优选地，所述目标核酸选自mRNA、融合基因RNA、circRNA、lncRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA和核酶RNA中的任意一种；优选地，当所述目标核酸为两种或两种以上的RNA时，所述检测方法包括：将对应每一种目标核酸的捕获探针制成探针池，用于对两种或两种以上的RNA进行同时捕获检测。7.根据权利要求1～4任一项所述的核酸的检测方法，其特征在于，所述待测样本选自：细胞样本、唾液样本、全血样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、组织样本、微生物样本和植物样本中的任意一种。8.一种检测目标核酸的试剂盒，其特征在于，其包括：如权利要求1～7任一项所述的核酸的检测方法中采用的捕获探针组合。9.根据权利要求8所述的RNA的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：提取液、蛋白酶K、稀释液和洗杂液中的至少一种。2CN114107446A权利要求书2/2页10.捕获探针组合在制备检测目标核酸的试剂盒中的应用，其特征在于，所述捕获探针组合为如权利要求1～7任一项所述的核酸的检测方法中采用的捕获探针组合。3CN114107446A说明书1/14页一种核酸的检测试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明涉及核酸检测技术领域，具体而言，涉及一种核酸的检测试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]RNA是存在于生物样本中的遗传信息载体，除了研究最为广泛的mRNA，近年来还发现了许多非编码的重要功能性RNA，包括lncRNA、circRNA、snoRNA和miRNA等。它们能够作为多种疾病的诊断和预后生物标志物，特别是在多种生物流体(如血浆、血