一种双特异性抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110551221A(43)申请公布日2019.12.10(21)申请号201910591110.2A61P19/02(2006.01)(22)申请日2019.07.02A61P29/00(2006.01)A61P37/02(2006.01)(71)申请人广州爱思迈生物医药科技有限公司A61P25/00(2006.01)地址510000广东省广州市黄埔区开源大道11号B10栋5层511房(自主申报)(72)发明人张文军李峰华亚南刘嘉熙方春华(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202代理人颜希文周全英(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P35/02(2006.01)权利要求书2页说明书16页序列表14页附图9页(54)发明名称一种双特异性抗体及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及一种双特异性抗体及其制备方法与应用。本发明的双特异性抗体包含能结合CD20的结构域、能结合CD3的结构域和异源二聚体Fc区域，所述能结合CD20的结构域和能结合CD3的结构域各自独立地选自Fab区域、ScFv区域或sDab区域。本发明的双特异性抗体能稳定、高效靶向CD20和CD3，并能够介导T细胞特异性杀伤肿瘤细胞。CN110551221ACN110551221A权利要求书1/2页1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包含能结合CD20的结构域、能结合CD3的结构域和异源二聚体Fc区域，所述能结合CD20的结构域和能结合CD3的结构域各自独立地选自Fab区域、ScFv区域或sDab区域。2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述能结合CD20的结构域包括第一免疫球蛋白Fab区域，所述第一免疫球蛋白Fab区域主要由相互结合的第一重链与第一轻链形成，所述第一重链的可变区具有如SEQIDNo.:2所示的氨基酸序列，所述第一轻链的可变区具有如SEQIDNo.:4所示的氨基酸序列；和/或所述能结合CD3的结构域包括第二免疫球蛋白Fab区域，所述第二免疫球蛋白Fab区域主要由相互结合的第二重链与第二轻链形成，所述第二重链的可变区具有如SEQIDNo.:6所示的氨基酸序列，所述第二轻链的可变区具有如SEQIDNo.:10所示的氨基酸序列；所述异源二聚体Fc区域由两条多肽链构成，每条多肽链包含带相反电荷的不对称氨基酸修饰。3.如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链的CH1部分以及第一轻链的CL部分均包含一个取代天然半胱氨酸残基的非半胱氨酸残基，以及一个取代非天然半胱氨酸的半胱氨酸残基。4.如权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链的CH1部分中取代天然半胱氨酸残基的非半胱氨酸残基与第一轻链的CL部分中取代非天然半胱氨酸的半胱氨酸残基形成二硫键。5.如权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链的CH1部分中，取代天然半胱氨酸残基的非半胱氨酸残基为C220S，取代非天然半胱氨酸的半胱氨酸残基为L128C。6.如权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一轻链的CL部分中，取代天然半胱氨酸残基的非半胱氨酸残基为C214S，取代非天然半胱氨酸的半胱氨酸残基为F118C。7.如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二免疫球蛋白Fab区域不包含取代天然半胱氨酸残基的非半胱氨酸残基，且不包含取代非天然半胱氨酸残基的半胱氨酸残基。8.如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述能结合CD20的结构域包括第一免疫球蛋白Fab区域，所述能结合CD3的结构域包括第二免疫球蛋白Fab区域；所述第一重链与第二重链相互结合，形成异源二聚体Fc区域。9.如权利要求8所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链和第二重链来自人抗体IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。10.如权利要求8所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链具有如SEQIDNo.:1所示的氨基酸序列，第一轻链具有如SEQIDNo.:3所示的氨基酸序列，所述第二重链具有如SEQIDNo.:5或SEQIDNo.:7所示的氨基酸序列，第二轻链具有如SEQIDNo.:9所示的氨基酸序列。11.如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述能结合CD20的结构域包括第一免疫球蛋白Fab区域，所述能结合CD3的结构域包括scFv-Fc融合蛋白多肽链；所述scFv-Fc融合蛋白多肽链中scFv区域的重链可变区具有如SEQIDNo.:6所示的氨基酸序列，轻链2CN110551221A权利要求书2/2页可变区具有如SEQIDNo.:10所示的氨基酸序列，所述第一重链