抗GFAP蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110903389A(43)申请公布日2020.03.24(21)申请号201911279576.5C12N15/13(2006.01)(22)申请日2019.12.13C12N5/20(2006.01)G01N33/574(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNO.174072019.03.21(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人李恢波王小亚李玲玲吴茂黄信超(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人黄以琳施文武(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C07K16/18(2006.01)序列表4页附图3页(54)发明名称抗GFAP蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种抗GFAP蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的氨基酸序列。本发明选取GFAP蛋白第292位至第432位氨基酸对应的核苷酸片段，通过大肠杆菌进行重组表达。纯化后的重组蛋白作为免疫原，对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗GFAP蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系10G1G11H7,以及由该细胞系所分泌的抗GFAP蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达GFAP蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN110903389ACN110903389A权利要求书1/1页1.一种抗GFAP蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.17407的小鼠杂交瘤细胞系分泌。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别GFAP蛋白。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。6.一种抗GFAP蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，选取GFAP蛋白第292位至第432位氨基酸片段作为免疫原并进行蛋白重组，所述重组蛋白经由大肠杆菌重组表达。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述GFAP蛋白的第292位至第432位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。8.一株分泌抗GFAP蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系10G1G11H7，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO.17407。9.权利要求1-5任一所述的抗GFAP蛋白单克隆抗体，在GFAP蛋白免疫检测中的用途。10.根据权利要求9所述的免疫检测，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。2CN110903389A说明书1/7页抗GFAP蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗GFAP蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。背景技术[0002]胶质纤维酸性蛋白GFAP(glialfibrillaryacidicprotein)是一种分子量为55kDa的胞浆蛋白，以单体形式存在。研究发现其至少含有氨基端“头部”、羧基端“尾部”和中部螺旋杆状区三个功能域，是一种Ⅲ型中间丝状蛋白。人的GFAP基因定位于染色体17q21区域。GFAP基因含有9个外显子和8个内含子，还有4个可选择的外显子和2个可选择的内含子。[0003]星形胶质细胞(astrocyte，AS)广泛分布于中枢神经系统各个部位，约占正常成年人脑细胞总数的40％。GFAP则是星形胶质细胞和星形胶质细胞源性肿瘤的标志蛋白，对神经元起支撑和营养作用，参与星形胶质细胞的许多生物学功能，包括细胞的增殖与分裂、维护血脑屏障的正常生理功能、自噬、维持神经递质的平衡等。GFAP是星形胶质细胞特有的中间丝蛋白，是胶质瘤的标志蛋白。在正常情况下，细胞胞质内的GFAP循环降解，血液中GFAP水平较稳定；而病理条件下，如病人的中枢神经系统受到损伤，其星形胶质细胞遭受破伤或坏死时，GFAP从胶质细胞中流出，穿过血脑屏障进入血液中，使GFAP浓度上调，因此GFAP在恶性胶质瘤中表现出异常过度表达。GFAP表达水平异常与多种遗传病和精神病相关，如亚历山大病