抗TSH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114149503A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111492336.0C12N5/20(2006.01)(22)申请日2021.12.08G01N33/76(2006.01)G01N33/577(2006.01)(83)生物保藏信息C07K14/59(2006.01)CGMCCNo.223182021.04.29C12N15/70(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司C12R1/19(2006.01)地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人彭永辉王小亚杨清海黄信超吴茂(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C07K16/26(2006.01)序列表5页附图1页(54)发明名称抗TSH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗TSH蛋白单克隆抗体，其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。上述技术方案依据TSH蛋白为α链和β链组成的二聚体结构、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，选取GLHA蛋白第220‑443位氨基酸片段所对应的核苷酸序列SEQIDNO.6和TSHB蛋白第18‑136位氨基酸片段所对应核苷酸序列SEQIDNO.7在PET27b载体上进行同源重组，制备SEQIDNO.1所示核苷酸序列；并通过大肠杆菌进行重组表达,对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和克隆，获得高效分泌抗TSH蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系11A2A8B7,并进行体外培养。本方案得到的抗体适用于免疫学检测。CN114149503ACN114149503A权利要求书1/1页1.一种抗TSH蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.22318的杂交瘤细胞系产生。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述抗TSH蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。5.一种抗TSH蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于,其免疫小鼠所用的抗原为SEQIDNO.1所示核苷酸序列所编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，采用GLHA蛋白第220位至443位氨基酸片段所对应的核苷酸序列SEQIDNO.6和TSHB蛋白第18位至136位氨基酸片段所对应核苷酸序列SEQIDNO.7在PET27b载体上进行同源重组，制备如SEQIDNO.1所示核苷酸序列。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在制备过程中，核苷酸序列SEQIDNO.6的上、下游引物分别为SEQIDNO.8和SEQIDNO.9所示的核苷酸序列；核苷酸序列SEQIDNO.7的上、下游引物分别为SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的核苷酸序列。8.一株分泌抗TSH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系11A2A8B7，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO.22318。9.权利要求1‑5任一所述的抗TSH蛋白单克隆抗体在人TSH蛋白免疫检测中的用途。10.一种人TSH蛋白免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测试剂内含有权利要求1‑4任一所述的抗TSH蛋白单克隆抗体为有效成分。2CN114149503A说明书1/7页抗TSH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗TSH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。背景技术[0002]TSH(thyrotropin，thyroidstimulatinghormone，TSH)促甲状腺激素，是由垂体前叶分泌的重要糖蛋白激素。人类TSH为一种糖蛋白，含211个氨基酸，糖类约占整个分子的15％。整个分子由两条肽链——α链和β链组成。腺垂体分泌促甲状腺激素，一方面受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素(TRH)的促进性影响，另一方面又受到甲状腺激素反馈性的抑制性影响，二者互相拮抗，它们组成下丘脑‑腺垂体‑甲状腺轴。促甲状腺激素通过与TSH受体(TSHreceptor，TSHR)结合，激活环磷酸腺苷(cyclicadenosinem