抗PSMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112480260A(43)申请公布日2021.03.12(21)申请号202011449337.2C12N5/20(2006.01)(22)申请日2020.12.09G01N33/574(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.196832020.04.24(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人李玲玲陈惠玲王小亚吴茂邓晓李恢波(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆林祥翔(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C07K16/30(2006.01)序列表4页附图1页(54)发明名称抗PSMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗PSMA蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达。发明人还提供了一株分泌抗PSMA蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系11D1E5E10，保藏号为：CGMCCNO.19683。抗PSMA蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达PSMA蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN112480260ACN112480260A权利要求书1/1页1.一种抗PSMA蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别PSMA蛋白。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别PSMA蛋白中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.19683的杂交瘤细胞系产生。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述抗PSMA蛋白单克隆抗体为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。7.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由重组蛋白为免疫原进行制备，所述重组蛋白包含具有抗原性的PSMA片段以及组氨酸蛋白标签，所述PSMA片段为人PSMA蛋白的第307位至第750位氨基酸片段。8.一株分泌抗PSMA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系11D1E5E10，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO.19683。9.权利要求1‑8任一所述的抗PSMA蛋白单克隆抗体，在PSMA蛋白免疫检测中的用途。10.根据权利要求9所述的免疫检测，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。2CN112480260A说明书1/6页抗PSMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗PSMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。背景技术[0002]前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤，世界范围内男性癌症相关死亡率第三位。据统计，目前约有1‑2％的男性死于前列腺癌。近年来,随着社会的高速发展，人们生活质量得到提高,人口平均寿命延长及诊疗技术也在日益进步,但前列腺癌发病率仍然呈逐渐上升的趋势，目前前列腺癌的发病率约为11.2％。前列腺癌的早期诊断,也日益受到学者的重视。[0003]前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌细胞的表面上以及在多种实体瘤的新脉管系统中独特地过度表达。因此，PSMA作为用于前列腺癌的检测和治疗的临床生物标记已引起了注意。前列腺特异膜抗原，简称PSMA，首次发现于1987年。它是一个Ⅱ型跨膜糖蛋白，它由750个氨基酸构成包含19个氨基酸的胞内区、24个氨基酸的跨膜区和707个氨基酸的胞外区，蛋白质的分子量为84KDa,经糖基化作用后，分子量约100KDa。PSMA的基因定位于11号染色体的断臂上，全长60Kb,包括19个外显子和18个内含子。[0004]PMSA高表达于前列腺癌上皮细胞膜，其表达量与肿瘤细胞的数量及侵袭性呈正相关。PSMA主要表达与前列腺上皮细胞膜上，在前列腺癌有非常高比例的表达，在恶性度较高的、转移性的及激素难治性的前列腺癌其表达进一步增高。因此，PSMA具有较高的