一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110951744A(43)申请公布日2020.04.03(21)申请号201911232330.2G01N33/68(2006.01)(22)申请日2019.12.05(71)申请人安徽省昂普拓迈生物科技有限责任公司地址230000安徽省合肥市经济技术开发区石柱路339号金星商业城2期2002室(72)发明人罗昭锋方晓娜王进军张立云盛六四张峥(74)专利代理机构合肥市长远专利代理事务所(普通合伙)34119代理人刘勇(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)C07K14/00(2006.01)C07K14/525(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表1页附图3页(54)发明名称一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体及其应用(57)摘要本发明公开了一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体，所述核酸适配体序列包含以下核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列；B、与SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；C、在严格条件下与SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列转录的RNA序列；其中，上述核苷酸序列均能够特异性结合肿瘤坏死因子-α。本发明还公开了一种核酸适配体衍生物。本发明还公开了上述核酸适配体或核酸适配体衍生物的应用。本发明能与肿瘤坏死因子-α特异性结合。CN110951744ACN110951744A权利要求书1/1页1.一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列包含以下核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列；B、与SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；C、在严格条件下与SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQIDNos.1-4所示的任意一个DNA序列转录的RNA序列；其中，上述核苷酸序列均能够特异性结合肿瘤坏死因子-α。2.根据权利要求1所述特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列被修饰，所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化。3.根据权利要求1所述特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA或酶。4.一种核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是由权利要求1-3任一项中所述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由权利要求1-3任一项所述核酸适配体改造成的肽核酸。5.一种如权利要求1-3任一项所述核酸适配体或权利要求4所述核酸适配体衍生物在纯化肿瘤坏死因子-α、检测肿瘤坏死因子-α中的应用。6.一种如权利要求1-3任一项所述核酸适配体或权利要求4所述核酸适配体衍生物在制备检测肿瘤坏死因子-α的试剂盒、检测肿瘤坏死因子-α的分子探针中的应用。2CN110951744A说明书1/10页一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物和医学技术领域，尤其涉及一种特异性结合肿瘤坏死因子-α的核酸适配体及其应用。背景技术[0002]肿瘤坏死因子(Tumornecrosisfactoralpha,TNF-α)主要由单核细胞和巨噬细胞产生，包括膜结合前体蛋白和分泌型蛋白两种形式。膜结合前体蛋白在TNF转化酶TACE的作用下，切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸残基的分泌型TNF-α(17kDa)。TNF-α是一种具有广泛生物学作用的细胞因子，通过与细胞表面的TNFI型和II型受体结合发挥作用，主要作用有杀伤或抑制肿瘤细胞；提高中性粒细胞的吞噬能力；抗感染；促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化；促进细胞增殖和分化等。TNF-α的主要作用是调节免疫细胞。作为内源性热原的TNF-α能够诱导发热，它在许多疾病中，如心血管疾病、恶病质和败血症所致的多器官功能衰竭、类风湿性关节炎、多发性硬化症、炎症性肠病、移植性抗宿主病和骨髓造血紊乱综合征等的病理过程中也起着重要的介质作用。TNF-α产生的调节异常与多种人类疾病有关，包括阿尔茨海默病，癌症，严重抑郁症，牛皮癣和炎症性肠病(IBD)。对于肿瘤，TNF-α除了对肿瘤细胞本身具有细胞毒性之外，它也能摧毁实体瘤周围的血管组织，并通过血栓的形成，来阻断肿瘤的血液营养供应最终导致肿瘤的坏死。一定浓度的TNF-α能明显降低实体瘤周围间隙组织的压力，扩大肿瘤周