一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109486824A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201811382638.0(22)申请日2018.11.20(71)申请人安徽省昂普拓迈生物科技有限责任公司地址230000安徽省合肥市经济技术开发区石柱路339号金星商业城2期2002室(72)发明人王进军张海燕方晓娜罗昭锋(74)专利代理机构合肥市长远专利代理事务所(普通合伙)34119代理人金宇平(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)C07K14/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表1页附图1页(54)发明名称一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用(57)摘要本发明公开了一种特异性结合Taq酶的核酸适配体，所述核酸适配体序列至少含有A序列、B序列中的一种。本发明还公开了上述特异性结合Taq酶的核酸适配体的筛选方法，如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2所示的DNA序列的筛选方法包括如下步骤：以Taq酶为靶标物质，经磁珠筛选和SPR-SELEX筛选交替筛选得到。本发明还公开了一种核酸适配体衍生物，所述核酸适配体衍生物是由上述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由上述核酸适配体改造成的肽核酸。本发明还公开了上述核酸适配体或上述核酸适配体衍生物在抑制Taq酶活性中的应用。CN109486824ACN109486824A权利要求书1/1页1.一种特异性结合Taq酶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列至少含有A序列、B序列中的一种，其中，A序列包含以下四种序列中的至少一种：1)、如SEQIDNo.1所示的DNA序列；2)、与SEQIDNo.1所示DNA序列具有60％以上同源性，且能够特异性结合Taq酶的DNA序列；3)、在严格条件下与SEQIDNo.1所示DNA序列杂交的DNA序列；4)、由SEQIDNo.1所示DNA序列转录的RNA序列；B序列包含以下四种序列中的至少一种：1)、如SEQIDNo.2所示的DNA序列；2)、与SEQIDNo.2所示DNA序列具有60％以上同源性，且能够特异性结合Taq酶的DNA序列；3)、在严格条件下与SEQIDNo.2所示DNA序列杂交的DNA序列；4)、由SEQIDNo.2所示DNA序列转录的RNA序列。2.根据权利要求1所述特异性结合Taq酶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列被修饰，所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。3.根据权利要求1所述特异性结合Taq酶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶。4.一种如权利要求1所述特异性结合Taq酶的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2所示的DNA序列的筛选方法包括如下步骤：以Taq酶为靶标物质，经磁珠筛选和SPR-SELEX筛选交替筛选得到。5.一种核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是由权利要求1-3任一项中所述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由权利要求1-3任一项所述核酸适配体改造成的肽核酸。6.一种如权利要求1-3任一项所述核酸适配体或权利要求5所述核酸适配体衍生物在抑制Taq酶活性中的应用。2CN109486824A说明书1/8页一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用。背景技术[0002]TaqDNA聚合酶(ThermusaquaticusDNApolymerase)，简称Taq酶，是从水生栖热菌中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶，此菌于1969年由Brock分离自美国黄石公园温泉，其生长温度为70-75℃，1985年，R.K.Saiki等将分离纯化后的TaqDNA聚合酶应用于PCR反应，对于PCR的应用有里程碑的意义。PCR循环包括变性(90℃左右)、退火(50℃左右)、延伸(70℃左右)，每一步对温度的要求都不一样，多数酶在高温时即变性失活，然而该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，所以不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷，得以大量应用，同时也大大降低了成本。现该酶广泛应用于疾病诊断与治疗、传染病检测、药物作用机理等医药领域。[0003]TaqDNA聚合酶在75-80℃时活性最高，但是在温度较低时，Taq酶的活性依然存在，这就会使得在PCR反应的初始阶段，由于引物的量比模板的量高出很多，在仪器升温过程中，容易出现引物互搭或引物和模板会有一些非特异性配对的现象，在TaqDNA聚合酶的作用下延伸，形成引物二聚体