一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110684774A(43)申请公布日2020.01.14(21)申请号201911080718.5(22)申请日2019.11.07(71)申请人郑州大学地址450001河南省郑州市高新区科学大道100号(72)发明人赵永星苏静静张楠曹坚杨阳(74)专利代理机构郑州优盾知识产权代理有限公司41125代理人冉珊敏(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)A61K31/7088(2006.01)A61P29/00(2006.01)A61P19/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图4页(54)发明名称一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用(57)摘要本发明涉及类风湿性关节炎药物研究领域，特别是指一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用。本发明提供的核酸适配体，在保留与DEK蛋白高亲和力结合的基础上，稳定性显著提高。该适配体可以通过与DEK蛋白结合抑制中性粒细胞形成NETs的能力，从而抑制炎症发生。本发明所述的核酸适配体具有广阔的应用前景，有望成为治疗类风湿性关节炎的新型核酸分子，在临床应用上具有巨大的潜力。CN110684774ACN110684774A权利要求书1/1页1.一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体为在原始适配体的序列基础上，经化学修饰、基团修饰或/和序列延长得到的优化适配体序列，其中原始适配体的序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述化学修饰指在核酸适配体上进行2’-OMe修饰。3.根据权利要求2所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述序列延长指在核酸适配体的3'端增加反式脱氧胸苷。4.根据权利要求2所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述基团修饰指在核酸适配体的5'端增加胆固醇。5.根据权利要求2-4任一项所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述优化适配体序列如对SEQIDNo.1进行8-13位2’-OMe+3’端idT修饰或对SEQIDNo.1进行22-27位2’-OMe+3’端idT修饰或对SEQIDNo.1进行8-13位和22-27位2’-OMe+3’端idT修饰或对SEQIDNo.1进行1-41位2’-OMe+3’端idT修饰或对SEQIDNo.1进行5’端胆固醇+1-41位2’-OMe+3’端idT修饰。6.权利要求5所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体在制备抑制中性粒细胞形成NETs药物中的应用。7.权利要求5所述的特异性结合DEK蛋白的核酸适配体在制备预防和治疗类风湿性关节炎药物中的应用。2CN110684774A说明书1/6页一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用技术领域[0001]本发明涉及类风湿性关节炎药物研究领域，特别是指一种特异性结合DEK蛋白的核酸适配体及其应用。背景技术[0002]类风湿性关节炎（RA）是一种全身慢性免疫紊乱性疾病，该疾病特征是关节疼痛、肿胀、僵硬和骨组织和软骨组织破坏，严重者甚至丧失行动能力，造成患者的生活质量严重下降，患者寿命缩短。风湿性关节炎的病理改变主要为关节腔滑膜细胞增生，炎性细胞侵蚀发炎关节，关节腔内新生血管生，关节腔内炎症因子网络紊乱，生成一系列酶，侵蚀软骨及软骨组织，导致关节损伤和畸形。目前，临床上常用药物控制类风湿性关节炎发展和恶化，还不能被完全治愈。因此，研发一种高效、特异、稳定的治疗方法对类风湿性关节炎的防治具有重要意义。[0003]随着对RA发病机制研究的不断深入，中性粒细胞在RA关节局部的炎症发展和全身免疫反应过程中发挥着重要作用。中性粒细胞外陷阱（NeutrophilExtracellularTraps，NETs）是由中性粒细胞释放到胞外的包含有DNA、组蛋白、髓过氧化物酶、中性粒细胞弹性蛋白酶、组织蛋白酶G的网状结构。NETs可以将炎症因子和多种自身抗原外化，是瓜氨酸化自身抗原的来源，可诱导ACPA的产生，并激活成纤维细胞样滑膜细胞及B细胞。而ACPA和炎症因子（TNF-α，IL-8等）可以刺激NETosis的增强，进而导致恶性循环的产生，逐渐加重自身免疫反应。因此，及时抑制或清除异常的NETs，可有望减轻类风湿性关节炎的炎症反应。DEK蛋白是多细胞生物中含量丰富的可磷酸化核蛋白，参与染色质结构和基因调节，能够移位到细胞质进而分泌到细胞外。磷酸化和ADP-核糖基聚合化作用都可以使DEK蛋白从凋亡的细胞核进入细胞外而成为自身抗原。炎症部位活化的中性粒细胞能将DEK蛋白分泌至细胞外，其对NETs的产生十分重要。因此，DEK蛋白有望作为治疗类风湿性关节炎的新型靶标。[0004