一种特异性结合脂质运载蛋白-1的核酸适配体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111979249A(43)申请公布日2020.11.24(21)申请号202010736118.6A61P9/10(2006.01)(22)申请日2020.07.28(71)申请人复旦大学附属眼耳鼻喉科医院地址200031上海市徐汇区汾阳路83号(72)发明人高顺祥吴继红张圣海孙兴怀(74)专利代理机构上海申浩律师事务所31280代理人赵青李阳(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)C07K14/47(2006.01)C07K1/14(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/53(2006.01)A61K47/54(2017.01)A61P3/10(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表3页附图4页(54)发明名称一种特异性结合脂质运载蛋白-1的核酸适配体及其应用(57)摘要本发明涉及眼科学领域，具体是一种特异性结合脂质运载蛋白‑1(LCN1)的核酸适配体及其应用。本发明通过磁珠SELEX技术筛选，得到了一组与LCN1特异性结合的高亲和力核酸适配体，并通过截短和构建高稳定的迷你发夹结构等优化策略进一步改善核酸适配体的性能。本发明的核酸适配体具有广阔的应用前景，可用于临床样品中LCN1的捕获、体内外LCN1的检测、眼病中LCN1治疗药物的开发及靶向给药系统的构建等，为LCN1相关的检测技术的开发、临床诊断方法的发展和核酸药物的研发提供了有效的工具。CN111979249ACN111979249A权利要求书1/1页1.特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体，其核苷酸序列分别如SEQIDNo.1-SEQIDNo.8所示。2.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在制备脂质运载蛋白-1检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。3.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在制备脂质运载蛋白-1捕获、分离和纯化制剂中的应用。4.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在开发糖尿病视网膜病变早期诊断新方法中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的早期诊断新方法是基于所述的核酸适配体对脂质运载蛋白-1高亲和力的结合作用，用于糖尿病视网膜病变的早期快速诊断。6.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在制备糖尿病视网膜病变早期诊断试剂或试剂盒中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的早期诊断试剂或试剂盒通过所述的核酸适配体对脂质运载蛋白-1高亲和力的结合作用，检测临床样品中的脂质运载蛋白-1含量，用于糖尿病视网膜病变的早期快速诊断。8.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在构建眼病靶向给药系统中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的靶向给药系统是基于所述的核酸适配体对脂质运载蛋白-1强特异性的识别作用，用于药物的靶向运输和定点释放。10.如权利要求1所述的特异性结合脂质运载蛋白-1的高亲和力核酸适配体在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用。2CN111979249A说明书1/5页一种特异性结合脂质运载蛋白-1的核酸适配体及其应用技术领域[0001]本发明涉及眼科学领域，具体地说，是一种特异性结合脂质运载蛋白-1的核酸适配体及其应用。背景技术[0002]糖尿病视网膜病变(DiabeticRetinopathy，DR)是糖尿病最严重的微血管并发症之一,现已成为全球工作年龄人群第一位的致盲性眼病。由于DR的发病机制十分复杂，迄今为止临床上尚无有效的根治方法，唯有通过早期的诊断和干预才能有效降低其致盲风险。目前，临床上DR常用的诊断方法主要包括眼底检查、眼底血管造影、光学相干断层扫描和电生理等。尽管这些诊断方法各有优势，但往往需要通过多种技术进行联合诊断，且更倾向于DR的确诊和病情的评估，难以满足临床早期诊断的需求。[0003]脂质运载蛋白-1(lipocalin-1，LCN1)是DR特异的生物标志物，其在泪液中的浓度与DR的发生发展具有显著的计量依赖关系。据多个研究团队的报导，将泪液来源的LCN1作为DR的诊断靶点，具有无创、便捷、易获得和特异性高等优势，可为DR的筛查、早期诊断、干预和治疗提供帮助。[0004]目前亟需解决的问题是获得一种与LCN1特异性结合的高亲和力靶向识别分子。核酸适配体是一种功能类似于抗体的ssDNA或RNA，它是通过体外筛选的SELEX技术从随机核酸文库中获得的寡核苷酸片段。与抗体相比，核酸适配体作为一种新型的靶向识别分子具有显著的优势，例如：可体外筛选获得而不需要免疫动物，不易受pH、温度等环境因素影响而变性，可通过化