一种特异性结合哌替啶的核酸适配体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112029771A(43)申请公布日2020.12.04(21)申请号201911105554.7(22)申请日2019.11.13(71)申请人安徽省昂普拓迈生物科技有限责任公司地址230000安徽省合肥市经济技术开发区石柱路339号金星商业城2期2002室(72)发明人方晓娜罗昭锋韦唯张立云盛六四何磊(74)专利代理机构合肥市长远专利代理事务所(普通合伙)34119代理人刘勇(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表1页附图2页(54)发明名称一种特异性结合哌替啶的核酸适配体及其应用(57)摘要本发明公开了一种特异性结合哌替啶的核酸适配体，所述核酸适配体序列包含以下四种核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQIDNo.1所示的DNA序列；B、与SEQIDNo.1所示DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；C、在严格条件下与SEQIDNo.1所示DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQIDNo.1所示DNA序列转录的RNA序列；其中，上述四种核苷酸序列均能够特异性结合哌替啶。本发明还公开了一种核酸适配体衍生物。本发明还公开了上述核酸适配体或核酸适配体衍生物在制备检测哌替啶的试剂盒或检测哌替啶的分子探针中的应用。本发明能与哌替啶特异性结合，且化学性质稳定，易于保存和标记。CN112029771ACN112029771A权利要求书1/1页1.一种特异性结合哌替啶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列包含以下四种核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQIDNo.1所示的DNA序列；B、与SEQIDNo.1所示DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；C、在严格条件下与SEQIDNo.1所示DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQIDNo.1所示DNA序列转录的RNA序列；其中，上述四种核苷酸序列均能够特异性结合哌替啶。2.根据权利要求1所述特异性结合哌替啶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列被修饰，所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化。3.根据权利要求1所述特异性结合哌替啶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA或酶。4.一种核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是由权利要求1-3任一项中所述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由权利要求1-3任一项所述核酸适配体改造成的肽核酸。5.一种如权利要求1-3任一项所述核酸适配体或权利要求4所述核酸适配体衍生物在制备检测哌替啶的试剂盒或检测哌替啶的分子探针中的应用。2CN112029771A说明书1/7页一种特异性结合哌替啶的核酸适配体及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种特异性结合哌替啶的核酸适配体及其应用。背景技术[0002]哌替啶别名：地美露，杜冷丁，度冷丁，唛啶，美吡利啶，利多尔，吡利啶，唛啶利多尔等，外文名：Pethidine；Alodan,；Dolantin；Demerol；Lydol；Mepadin；Meperidine等，其分子式为C15H21NO2，其分子结构如下所示：[0003][0004]哌替啶是人工合成的阿片受体激动剂，属于苯基哌啶衍生物，是一种常应用于临床的合成镇痛药。哌替啶具有与吗啡类似的性质，其作用机理与吗啡相似，药理作用和临床应用与吗啡相同，但镇静、麻醉作用较小，仅相当于吗啡的1/10—1/8，作用时间可维持2—4小时左右，主要作用于中枢神经系统，对心血管、平滑肌亦有一定影响，毒副作用也相应较小，恶心、呕吐、便秘等症状均较轻微，对呼吸系统的抑制作用较弱，一般不会出现呼吸困难及过量使用等问题。[0005]哌替啶反复作用可成瘾，连续使用1-2周便可产生药物依赖性，不良反应与吗啡相似，被列为严格管制的麻醉药品。1987年国务院发布的《麻醉药品管理办法》将哌替啶列入其中进行严格管理。所以无论从其药理作用、成瘾性，对人体的危害，还是从法律文件规定上讲，哌替啶是一种毒品。[0006]目前哌替啶等毒品的检测方法有很多种，例如：免疫筛选法；气相色谱法，高效液相色谱等方法，色谱的方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求很高，需要提纯处理等，无法实现快速便捷的检测。目前的免疫筛选法都是依赖于抗体做的检测试剂盒，虽然有一些可以做到快速简单的检测，但是抗体制备过程比较复杂，批次之间有差异，也有一定的缺陷。[0007]核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SE