抗MPO蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112194724A(43)申请公布日2021.01.08(21)申请号202011115426.3C12N5/20(2006.01)(22)申请日2020.10.19G01N33/577(2006.01)G01N33/574(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/573(2006.01)CGMCCNO.196842020.04.24C12R1/91(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人吴茂高惠然邓晓王小亚李玲玲李恢波陈惠玲(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆林祥翔(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C07K16/40(2006.01)序列表5页附图2页(54)发明名称抗MPO蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗MPO蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了抗MPO蛋白单克隆抗体的制备方法，选取MPO第49位至第745位氨基酸区域，作为免疫原。发明人还提供了一株分泌抗MPO蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系12F3A4C11，保藏号为：CGMCCNO.19684。抗MPO蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达MPO蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN112194724ACN112194724A权利要求书1/1页1.一种抗MPO蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别MPO蛋白。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别MPO蛋白中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.19684的杂交瘤细胞系产生。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述抗MPO蛋白单克隆抗体为小鼠IgG2a亚型单克隆抗体。7.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由重组蛋白为免疫原进行制备，所述重组蛋白包含具有抗原性的MPO片段以及组氨酸蛋白标签，所述MPO片段为人MPO蛋白的第49位至第745位氨基酸片段。8.一株分泌抗MPO蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系12F3A4C11，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO.19684。9.权利要求1-8任一所述的抗MPO蛋白单克隆抗体，在MPO蛋白免疫检测中的用途。10.根据权利要求9所述的免疫检测，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。2CN112194724A说明书1/6页抗MPO蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗MPO蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。背景技术[0002]髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MP0)是一种由中性粒白细胞、巨噬细胞、单核细胞分泌的相对分子量为133～155kD，等电点为1.0的高阳离子糖蛋白。MPO由骨髓内进行合成并贮存于粒细胞嗜苯胺蓝颗粒(嗜天青颗粒)中而进入循环，在正常生理情况下，是中性粒细胞和单核细胞氧依赖性杀菌系统的重要组分，属于人体先天免疫系统的一部分，通过把H202和Cl-变为次氯酸破坏外来物质，然而在某些特殊条件下，由它催化反应而产生的一系列氧化物质((HOCl、3一氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等)生成过多，当其超过局部抗氧化剂的防御反应时，就会引起氧化应激以及氧化性组织损伤。[0003]MPO，主要由髓系细胞合成。编码人体的MPO基因在17号染色体(q23一q24)，基因片段长度约14×103bp，共有内含子11个，外显子12个。MPO是血红素过氧化物酶超家族之一。MPO是一个大小约150kD二聚体的糖蛋白，这个二聚体由两个亚单位聚合而成，每个亚单位均由一条Cc链(重链，约59kD)和一条β链(轻链，约13.5kD)构成，两个亚单位通过α链处的二硫键连接成为成熟的MPO，最终在多形核中