细胞裂解液、试剂盒及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113025608A(43)申请公布日2021.06.25(21)申请号201911247526.9(22)申请日2019.12.09(71)申请人深圳市真迈生物科技有限公司地址518000广东省深圳市罗湖区清水河街道清水河一路116号深业进元大厦2座5楼、6楼(72)发明人林群婷张萌刘丽春曾立董骆明杰张娟孙雷(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6869(2018.01)C12Q1/6806(2018.01)C40B50/06(2006.01)权利要求书1页说明书13页附图4页(54)发明名称细胞裂解液、试剂盒及应用(57)摘要本发明涉及分子生物学领域。具体而言，本发明涉及一种细胞裂解液、试剂盒及应用，包括细胞裂解方法、文库构建方法及该些方法的应用。本发明提供的一种有效成分由蛋白酶K和NP-40组成的细胞裂解液。该细胞裂解液组成简单，能有效裂解细胞、去除染色体上的蛋白质，且裂解后的核酸溶液可不用作任何处理，可直接进行后续反应包括DNA文库构建。利用该细胞裂解液的细胞裂解方法和文库制备方法能快速制备DNA文库，制备文库耗时短，且制备的文库可用于不同测序平台，且获得的测序数据的GC偏好(GCbias)较不明显。此外，本发明还提供的试剂盒可应用于基于测序的胚胎植入前遗传学筛查(PGS)。CN113025608ACN113025608A权利要求书1/1页1.一种细胞裂解液，其特征在于，所述细胞裂解液的有效成分由蛋白酶K和NP-40组成。2.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述裂解溶液由蛋白酶K、NP-40和H2O组成；任选地，所述蛋白酶K的浓度为0.002～200μg/mL；任选地，所述蛋白酶K的浓度为0.002～1μg/mL；任选地，所述蛋白酶K的浓度为0.002～0.1μg/mL；任选地，所述NP-40体积百分比浓度为1％～10％。3.一种细胞裂解方法，其特征在于，包括利用权利要求1或2所述的细胞裂解液裂解细胞；任选地，所述细胞为动物细胞；任选地，所述细胞的数量为1-200个；任选地，所述细胞的数目为1-10个；任选地，于55℃～65℃进行所述裂解，和/或裂解时间为30min～60min。4.根据权利要求3所述的裂解方法，其特征在于，所述裂解方法还包括加入终止反应液终止所述裂解；任选地，所述终止反应液为PMSF溶液；任选地，所述终止反应液的终浓度为0.5mM～1mM。5.一种核酸制备方法，其特征在于，包括利用权利要求3或4所述的方法裂解细胞，获得核酸；任选地，所述核酸为DNA。6.一种核酸文库制备方法，其特征在于，包括：利用权利要求5所述的方法，获得核酸；以及片段化所述核酸；任选地，还包括扩增片段化后的核酸，获得所述核酸文库；任选地，所述方法的步骤之间无纯化和/或分离操作；任选地，利用片段化试剂进行所述片段化；任选地，所述片段化试剂包括转座酶复合体；任选地，所述转座酶复合体为Tn5转座酶复合体。7.一种测序方法，其特征在于，包括对核酸文库进行测序，所述核酸文库利用权利要求6所述的方法制备。8.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的细胞裂解液；任选地，所述试剂盒还包括终止反应液；任选地，所述终止反应液包含PMSF；任选地，所述PMSF的浓度为不低于5mM。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含核酸片段化试剂；任选地，所述片段化试剂包含转座酶复合体；任选地，所述转座酶复合体为Tn5转座酶复合体。10.权利要求8或9所述的试剂盒在涉及细胞裂解的方法或装置中的应用；任选地，所述应用为胚胎植入前遗传学筛查。2CN113025608A说明书1/13页细胞裂解液、试剂盒及应用技术领域[0001]本发明涉及分子生物学领域。具体而言，本发明涉及一种细胞裂解液、细胞裂解方法、建库方法及应用。[0002]背景介绍[0003]目前，测序文库的构建是测序实现少量细胞染色体数据异常检测的必经步骤，其中细胞裂解获得gDNA是影响测序文库构建成功与否的关键因素。[0004]常用的细胞裂解方法有碱裂解法(主要成分为NaOH)、蛋白酶K裂解法等。[0005]碱裂解法主要采用NaOH裂解细胞，获得的gDNA对后续文库构建体系中缓冲液的要求高，如后续需加入含有能中和碱性的试剂，容易增加污染风险。[0006]蛋白酶K裂解法利用蛋白酶K降解蛋白以实现细胞裂解。蛋白酶K在较广的pH范围(pH4-12.5)、温度范围(37-60℃)、较高的盐浓度(如3MGuHCl)和变性剂(如4M尿素)中均有活性；一些去垢剂例如Tween20(5％)、TritonX-100(1％)或者SDS(1％)以及金属螯合剂EDTA等均不能使蛋白酶K失