胚胎裂解液及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114107440A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111417192.2(22)申请日2021.11.25(71)申请人和元生物技术（上海）股份有限公司地址200135上海市浦东新区国际医学园区紫萍路908弄19号楼(72)发明人李琴邵壮潘讴东茅伟杨兴林杨佳丽(74)专利代理机构华进联合专利商标代理有限公司44224代理人董洪荣(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12N15/89(2006.01)C12N9/22(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称胚胎裂解液及其应用(57)摘要本发明公开了一种胚胎裂解液，包括A组分和B组分，所述A组分包括浓度比为(4～6)mmol:(0.2～2)mmol:(0.05～0.5)mmol:(9～11)mg:(400～500)μl:(400～500)μl的钾盐、乙二胺四乙酸、镁盐、明胶、乙基苯基聚乙二醇和吐温20，所述B组分包括质量比为(15～25):1的蛋白酶K和链霉蛋白酶。本发明还公开了胚胎裂解液在裂解龋齿动物的受精卵或早期胚胎中的应用。本发明还公开了一种非诊断治疗目的的基因编辑试剂活性的检测方法，包括以下步骤：将基因编辑试剂显微注射至龋齿动物的受精卵或早期胚胎中进行基因编辑，培养；使用胚胎裂解液对培养后的受精卵或早期胚胎进行裂解；对裂解后的产物进行基因检测。本发明还公开了一种基因编辑试剂活性的检测试剂盒。CN114107440ACN114107440A权利要求书1/1页1.一种胚胎裂解液，其特征在于，包括A组分和B组分，所述A组分包括浓度比为(4～6)mmol:(0.2～2)mmol:(0.05～0.5)mmol:(9～11)mg:(400～500)μl:(400～500)μl的钾盐、乙二胺四乙酸、镁盐、明胶、乙基苯基聚乙二醇和吐温20，所述B组分包括质量比为(15～25):1的蛋白酶K和链霉蛋白酶。2.根据权利要求1所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述A组分中钾盐、乙二胺四乙酸、镁盐、明胶、乙基苯基聚乙二醇和吐温20的浓度比为(4.5～5.5)mmol:(0.8～1.2)mmol:(0.2～0.3)mmol:(9.5～10.5)mg:(430～470)μl:(430～470)μl，所述B组分中蛋白酶K和链霉蛋白酶的质量比为(18～22):1。3.根据权利要求1所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述A组分中钾盐、乙二胺四乙酸、镁盐、明胶、乙基苯基聚乙二醇和吐温20的浓度比为5mmol:1mmol:0.25mmol:10mg:450μl:450μl，所述B组分中蛋白酶K和链霉蛋白酶的质量比为20:1。4.根据权利要求1所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述钾盐与所述链霉蛋白酶的浓度比为(1～6)mmol:1mg。5.根据权利要求1～4任一项所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述A组分为水溶液形式；和/或，所述B组分为水溶液形式。6.根据权利要求1～4任一项所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述胚胎裂解液的工作浓度为(0.1～0.3)mg/ml；优选的，所述胚胎裂解液的工作浓度为(0.15～0.25)mg/ml。7.根据权利要求1～4任一项所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述乙二胺四乙酸为乙二胺四乙酸的盐酸盐形式。8.根据权利要求1～4任一项所述的胚胎裂解液，其特征在于，所述钾盐选自氯化钾、硫酸钾和硝酸钾中的任意一种或多种；和/或，所述镁盐选自氯化镁、硝酸镁和硫酸镁中的任意一种或多种。9.权利要求1～8任一项所述的胚胎裂解液在裂解龋齿动物的受精卵或早期胚胎中的应用，所述受精卵或早期胚胎为受精后发育4.5天以内的胚胎，所述龋齿动物为小鼠或大鼠。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，裂解的条件为先50℃～60℃，2.5h～3.5h；然后90℃～100℃，3min～8min。11.非诊断治疗目的的基因编辑试剂活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将基因编辑试剂显微注射至龋齿动物的受精卵或早期胚胎中进行基因编辑，培养，所述龋齿动物为小鼠或大鼠，所述培养的时间以使得所述受精卵或早期胚胎为受精后发育4.5天以内为准；使用权利要求1～8任一项所述的胚胎裂解液对所述培养后的受精卵或早期胚胎进行裂解，对裂解产物进行基因检测。12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，所述基因编辑试剂包括Cas9蛋白和sgRNA。13.一种基因编辑试剂活性的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～8任一项所述的胚胎裂解液。2CN114107440A说明书1/7页胚胎裂解液及其应用技术领域[0001]本发明涉及细胞裂解技术领域，具体涉及一种胚胎裂解液及其应用。背景技术[0002]