一种细胞裂解液及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110804554A(43)申请公布日2020.02.18(21)申请号201911103403.8(22)申请日2019.11.12(71)申请人南昌艾迪康医学检验实验室有限公司地址330008江西省南昌市青山湖大道1111号1栋(72)发明人王淑一吴鹏飞李允章(74)专利代理机构浙江千克知识产权代理有限公司33246代理人黎双华李欣玮(51)Int.Cl.C12N1/06(2006.01)C12Q1/48(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种细胞裂解液及其应用(57)摘要本发明公开了一种细胞裂解液及其应用。该细胞裂解液由非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水组成。所述非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水的体积比为：2:1:2:1:14。本发明的细胞裂解液能有效释放细胞的DNA并同时保留端粒的蛋白酶活性，可以应用于端粒酶活性的检测中，为端粒酶活性检测提供准确有效的样本。CN110804554ACN110804554A权利要求书1/1页1.一种细胞裂解液，其特征在于，所述细胞裂解液由非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水组成，所述非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水的体积比为：2:1:2:1:14。2.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述非离子去垢剂包括150mM氯化钠、1％NonidetP-40(NP-40)、50mMPH值为7.4的Tris-HCL和蒸馏水。3.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂包括0.2μMAprotinin、10μMLeupeptin、1μMPepstatinA和蒸馏水。4.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述磷酸酶抑制剂包括1mM原钒酸钠、1mM氟化钠、4mM焦磷酸钠、1.15mM铜酸钠和蒸馏水组成。5.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述RNA酶抑制剂包括异硫氰酸胍，含量是20U/ml。6.一种如权利要求1-5中任一项所述的细胞裂解液的应用，所述应用为将细胞裂解液用于端粒酶活性检测中。2CN110804554A说明书1/4页一种细胞裂解液及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，特别涉及一种生物和酶检验领域中用于细胞端粒酶活性检测的细胞裂解液及其应用。背景技术[0002]端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构。人端粒由6碱基重复序列(TTAGGG)和结合蛋白组成，其具有重要的生物学功能，如稳定染色体功能，防止染色体末端融合；保护染色体结构基因；调节正常细胞生长。在正常体细胞中，由于线性DNA复制5’端缺失，随着细胞不断增殖，端粒会逐渐缩短，当细胞端粒缩短到一定程度，细胞停止分裂，处于静止状态，而后细胞就会进入衰老期。端粒酶是一种核糖核蛋白，由RNA和蛋白质组成，其RNA为逆转录模板，蛋白为逆转录酶，以端粒末端为引物，合成端粒DNA重复序列。人正常体细胞一般端粒酶活性为阴性.而恶性肿瘤细胞90％呈阳性。研究结果表明，端粒及端粒酶与正常细胞生长调控及恶性肿瘤的形成密切相关。[0003]传统的端粒酶研究方法是以探针延伸为基础，测定端粒酶活性。由于需要大量的样本，且检验灵敏度受限制，此法很快被端粒重复扩增法(TRAP)取代，其基本原理则是利用端粒蛋白部分的逆转录酶活性，将RNA部分作为逆转录模板，以人工设计的一段序列为先导引物，另一段序列为后续引物进行RT-PCR，通过产物分析，判定酶活性的大小。而后续发展的端粒酶活性检测方法，也是以TRAP法为基础，如TRAP-ELISA、qPCR-TRAP等。基于这些检测端粒酶活性的方法，就需要一种有效的细胞裂解液，能释放细胞的核酸又同时能保留蛋白的活性。[0004]因此，基于上述需求，本发明开发了一种细胞裂解液，本发明的裂解液能够同时获取核酸和蛋白，保证蛋白酶的活性，且成分安全、绿色。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种用于端粒酶活性检测的细胞裂解液。本发明的细胞裂解液能够同时获取核酸和蛋白，保证蛋白酶的活性，且成分安全、绿色，能够用于端粒酶活性检测中，具有简单快捷等优点。[0006]为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：[0007]一种细胞裂解液，所述细胞裂解液由非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水组成，所述非离子型去垢剂，蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，RNA酶抑制剂和蒸馏水的体积比为2:1:2:1:14。[0008]进一步地，所述非离子去垢剂包括150mM氯化钠、1％NonidetP-40(NP-40)、50mMPH值为7