一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113265397A(43)申请公布日2021.08.17(21)申请号202110609354.6(22)申请日2021.06.01(71)申请人上海捷瑞生物工程有限公司地址201619上海市松江区洞泾镇沈砖公路5398弄13、14号(72)发明人龙桂梅楚思远陈茂阳肖爱军(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272代理人郎祺(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法(57)摘要本发明涉及DNA提取技术领域，提供了一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法。该用于酵母基因组提取的细胞裂解液包括的组分及其含量如下：异硫氰酸胍50～60g/L，Tris‑base1～10g/L，EDTA·2Na8～15g/L、吐温‑201～10％。本发明提供的酵母基因组提取试剂盒比现有技术省时、省力，裂解细胞彻底，实验过程中避免使用了氯仿，减少对实验操作人员的伤害，提取出的基因组产量高，可直接用于后续实验，无需再对基因组进行纯化。CN113265397ACN113265397A权利要求书1/1页1.一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液，其特征在于，包括的组分及其含量如下：异硫氰酸胍50～60g/L，Tris‑base1～10g/L，EDTA·2Na8～15g/L、吐温‑201～10％。2.根据权利要求1所述的悬细胞裂解液，其特征在于，包括的组分及其含量如下：异硫氰酸胍54.2g/L，Tris‑base3.6g/L，EDTA·2Na9.4g/L，吐温‑202％。3.一种包括如权利要求1或2所述的细胞裂解液的用于酵母基因组提取的试剂盒。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括山梨醇缓冲液、SDS缓冲液、溶壁酶溶液、RNaseA溶液、蛋白酶K溶液和7U吸附柱；所述山梨醇缓冲液的浓度优选为0.1g/ml；所述SDS缓冲液的浓度优选为0.8％。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述溶壁酶溶液的浓度为10mg/ml。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述RNaseA溶液的浓度为15mg/ml。7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液的浓度为20mg/ml。8.一种采用如权利要求3‑7任一项所述试剂盒的用于酵母基因组提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，取过夜培养的酵母菌液，离心，收集菌体；向收集的所述菌体中依次加入所述山梨醇缓冲液和溶壁酶溶液，充分混匀并温育20‑40分钟；步骤二，离心，弃上清；向沉淀中加入所述SDS缓冲液重悬沉淀，然后加入所述RNaseA溶液，充分混匀，室温放置3‑10分钟；步骤三，加入所述细胞裂解液，混匀，再加所述蛋白酶K溶液混匀，在60‑80℃条件下保温；步骤四，冷却至室温，加入无水乙醇，充分混匀后加到所述7U吸附柱上；步骤五，离心，弃去收集管中的废液，加入80％乙醇溶液，离心，取下吸附柱，弃去收集管中的废液；步骤六，重复所述步骤五；离心以去除残留的乙醇；将所述吸附柱放入新的洁净的离心管中，在吸附柱中央加入50～100μlTE缓冲液，室温或37℃放置；步骤七，离心，离心管中的液体即为所述酵母基因组。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，酵母菌液的密度不超过2.5×107Cells/ml；所述酵母菌液、山梨醇缓冲液、溶壁酶溶液、SDS缓冲液、细胞裂解液、蛋白酶K溶液的体积比为1:0.2‑0.8：0.0025‑0.005：0.05‑0.3：0.1‑0.2：0.01‑0.02。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法使用的RNaseA溶液、无水乙醇和细胞裂解液的体积比为0.01‑0.02：1：1。2CN113265397A说明书1/4页一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法技术领域[0001]本发明涉及DNA提取技术领域，尤其涉及一种酵母基因组提取的的细胞裂解液、含有该裂解液的试剂盒以及使用该试剂盒提取酵母基因组的方法。背景技术[0002]酵母因其遗传背景清楚、操作简便、生长快速等特点，常常作为真核基因组表达的模式体系。此外，酵母还广泛用于基因工程和食品生产。在研究酵母过程中，提取其基因组进行目的基因的检测是重要的一步。[0003]酵母细胞壁坚韧厚实，厚度为0.1‑0.3μm，重量占细胞干重的18％‑30％，具有维持细胞形态和细胞间识别的重要作用。它的结构类似于三明治。外层是甘露聚糖，中间是蛋白质分子层，内层是葡聚糖。外层的甘露聚糖主链以α‑1,6糖苷键结合，支链以α‑1,2或α‑1,3糖苷键结合，内层的葡聚糖以β‑1,3糖苷键结合，形成网状结构，维持细胞壁的强度和韧