抗HER-2蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621069A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202111037454.2G01N33/577(2006.01)(22)申请日2021.09.06G01N33/574(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人杨清海陈惠玲王小亚周洪辉高惠然(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆林祥翔(51)Int.Cl.C07K16/32(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表4页附图2页(54)发明名称抗HER-2蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可以识别人HER‑2抗原的单克隆抗体，其制备方法以及其在免疫检测中的用途。本发明提供一种抗HER‑2蛋白兔单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.6所示的氨基酸序列。该抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达HER‑2蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN113621069ACN113621069A权利要求书1/1页1.一种抗HER‑2蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.6所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的编码DNA序列为SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的编码DNA序列为SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别HER‑2蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为兔单克隆抗体。5.一种抗HER‑2蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫兔的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达；选择1033‑1255位点的蛋白片段，其为SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；优化成适合在大肠杆菌表达的基因片段,其为SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；并将该基因片段克隆至pET‑32a载体上。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含TrxA蛋白标签和组氨酸蛋白标签。7.权利要求1‑4任一所述的单克隆抗体在HER‑2蛋白免疫检测中的用途。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。9.一种HER‑2蛋白免疫组化检测试剂，其特征在于，所述免疫组化检测试剂含有权利要求1‑4任一所述的抗HER‑2蛋白单克隆抗体为其有效成分。2CN113621069A说明书1/6页抗HER‑2蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗HER‑2蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]HER‑2基因(ERBB2基因)定位于17q12，其表达的蛋白是表皮生长因子受体家族的成员之一，亦称为受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，RTK)erbB‑2，HER‑2基因可以编码分子量185kDa为的酪氨酸激酶活性跨膜糖蛋白。HER‑2与配体结合形成二聚体，构象发生改变，导致细胞内受体酪氨酸激酶的磷酸化，引起信号通路上的连锁反应，促进细胞增殖分化。国内外研究报道，HER‑2过度表达与乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移密切相关。[0003]乳腺癌个体化沴疗在临床实践中发挥着越来越重要的作用。依据受体状态选择乳腺癌内分泌治疗和分子靶向治疗成为个体化诊疗的典范尤其是人表皮生长因子受体(HER‑2)在乳腺癌治疗中的地位越来越受重视，不仅可以预测细胞毒性药物蒽环类或紫杉类药物的疗效，而且已经成为评价HER‑2抗靶向药物临床获益的重要分子标志物。针对HER‑2的单克隆抗体曲妥珠单抗，使HER‑2阳性乳腺癌患者复发风险明显降低，无论单药、与化疗联合或辅助治疗均能够持续改善患者的无病生存时间，因其在乳腺癌治疗取得的卓越疗效，成为肿瘤分子靶向治疗的代表。因此，根据HER‑2表达状态制定细胞毒性药物及靶向药物的合理治疗方案，并预测药物疗效和评价预后已经成为乳腺癌沴疗的主要策略。[0004]因此，开发具有高特异性和高敏感性的HER‑2免疫组化单克隆抗体对于乳腺癌病理诊断和指导靶向用药具有重要意义。发明内容[0005]发明人提供了一种