抗BTLA蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003607A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202310004593.8C12N15/13(2006.01)(22)申请日2023.01.03C12N5/20(2006.01)C07K19/00(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/577(2006.01)CGMCCNO219752021.03.24G01N33/68(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人杨溢璐杨清海陈惠玲王小亚周洪辉(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219专利代理师方圆(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C07K16/28(2006.01)序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称抗BTLA蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可以识别人BTLA抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案化学合成BTLA蛋白的105‑121位氨基酸为抗原肽，偶联KLH后得到免疫原。所述BTLA‑KLH蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗BTLA蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株AbM58087‑7H4,以及由该细胞株所分泌的抗BTLA蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达BTLA蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN116003607ACN116003607A权利要求书1/1页1.一种抗BTLA蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的编码DNA序列为SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的编码DNA序列为SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别BTLA蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG1κ亚型单克隆抗体。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO21975的杂交瘤细胞株产生。6.一种抗BTLA蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，选取BTLA蛋白中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列,在其羧基端添加了一个半胱氨酸后，与载体蛋白KLH进行偶联作为免疫原。7.一株分泌抗BTLA蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株AbM58087‑7H4，所述细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO21975。8.权利要求1‑5任一所述的单克隆抗体在BTLA蛋白免疫检测中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。10.一种BTLA蛋白免疫组化检测试剂，其特征在于，所述免疫组化检测试剂含有权利要求1所述的抗BTLA蛋白单克隆抗体为其有效成分。2CN116003607A说明书1/6页抗BTLA蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗BTLA蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。背景技术[0002]BTLA(CD272)是一种重要的共抑制受体，其配体为疱疹病毒侵入介质(HVEM)。虽然BTLA与PD‑1和CTLA‑4有相似之处，但它们在表达和功能方面有所不同。HVEM在各种细胞类型中广泛表达，并参与免疫稳态。HVEM在多种肿瘤中表达上调，靶向BTLA和HVEM在肿瘤免疫治疗中表现出非常富有前景的应用潜力。[0003]BTLA属于CD28家族，与PD‑1和CTLA‑4具有结构相似性。它具有细胞外免疫球蛋白结构域、免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)以及免疫受体基于酪氨酸的开关基序(ITSM)。BTLA信号转导包括ITIMs的磷酸化和含有SH2结构域的磷酸酶1(SHP‑1)/SHP‑2结合，从而抑制T细胞增殖和细胞因子的产生。[0004]在健康人中，来自外周血的幼稚CD4+T和CD8+T细胞的BTLA表达较高。在CD4+分化期间，BTLA的表达保持较高水平，而在CD8+T细胞分化期间，BTLA的表达下调。在γδ‑T细胞上也观察到类似的结果，BTLA在静止的Vγ9Vδ2细胞(人外周血中的主要γδ‑T细胞亚群)上高度表达，并在Vγ9Vδ2分化过程中下调