抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113265003A(43)申请公布日2021.08.17(21)申请号202110384586.6C12N15/13(2006.01)(22)申请日2021.04.09C12N5/20(2006.01)G01N33/577(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/573(2006.01)CGMCCNo.207772020.09.17G01N33/574(2006.01)(71)申请人福州迈新生物技术开发有限公司地址350108福建省福州市闽侯县科技东路3号福州高新区海西高新技术产业园创新园12号楼(72)发明人陈泳杨清海陈惠玲王小亚胡滨阳陈昌星(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人方圆林祥翔(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书6页C07K16/40(2006.01)序列表3页附图2页(54)发明名称抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可以识别人TdT抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取TdT蛋白C末端的1‑150位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21(DE3)表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含TdT蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗TdT蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株32D5,以及由该细胞株所分泌的抗TdT蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达TdT蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。CN113265003ACN113265003A权利要求书1/1页1.一种抗TdT单克隆抗体，由保藏号为CGMCCNO20777的杂交瘤细胞株产生。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别TdT蛋白。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的编码DNA序列为SEQID2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的编码DNA序列为SEQID3所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQID4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID5所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG2b亚型单克隆抗体。6.一种抗TdT蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TdT蛋白片段及组氨酸蛋白标签。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述TdT蛋白片段为TdT蛋白的第1位至第150位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。8.一株分泌抗TdT蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株32D5，所述细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO20777。9.权利要求1‑6任一所述的单克隆抗体在TdT蛋白免疫检测中的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。2CN113265003A说明书1/6页抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。背景技术[0002]末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)是细胞核内的一种酶，为无须模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到DNA分子3’‑OH端。TdT分子量为32000道尔顿，由α和β两个肽链构成，后两者分子量分别为8000道尔顿和24000道尔顿。[0003]TdT基因位于人染色体10q23‑q24，位于鼠染色体19。TdT有多方面的功能，其主要功能有：TdT可以作为一种无须模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到DNA分子3’‑OH端，例如利用外源末端脱氧核苷酸转移酶对DNA链断裂的3’‑OH末端进行荧光标记；MoteaEA等研究发现：在抗体基因重排期间，TdT可将核糖核苷酸加入到T细胞受体和B细胞受体V、D和J的外显子区；正常情况下TDT可在胸腺组织中表达，也可在儿童及年轻人的扁桃体、淋巴结中少量表达。[0004]TdT在淋巴造血系统肿瘤的诊断中具有重要的意义，其在急性髓系白血病的肿瘤细胞中阴性表达，而在急性淋巴细胞白血病的肿瘤细胞中阳性表达，可作为鉴别急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病的标