一种测定TAT含量的试剂盒及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114689875A(43)申请公布日2022.07.01(21)申请号202210621395.1(22)申请日2022.06.02(71)申请人深圳市帝迈生物技术有限公司地址518000广东省深圳市光明区玉塘街道田寮社区光侨路高科创新中心B座10层(72)发明人韩学娉(74)专利代理机构深圳市瑞方达知识产权事务所(普通合伙)44314专利代理师张秋红(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/573(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/58(2006.01)权利要求书2页说明书16页附图1页(54)发明名称一种测定TAT含量的试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种测定TAT含量的试剂盒及其制备方法，试剂盒包括R1、R2、R3试剂，R1试剂包括偶联有链霉亲和素的磁微粒，R2试剂包括生物素标记的凝血酶抗体，R3试剂包括碱性磷酸酶标记的抗凝血酶抗体；方法包括：取活化磁微粒、链霉亲和素混匀，得到偶联有链霉亲和素的磁性微粒；取活化后的凝血酶抗体、生物素混匀，得到生物素标记的凝血酶抗体；取活化后的抗凝血酶抗体、碱性磷酸酶混合，得到碱性磷酸酶标记的抗凝血酶抗体；放至保存液中保存，得到试剂盒；本发明利用链霉亲和素、生物素的放大效应，采用磁微粒作为载体，碱性磷酸酶作为化学发光标记物，使得灵敏度高、特异性强、试剂稳定性好、结果准确可靠。CN114689875ACN114689875A权利要求书1/2页1.一种测定TAT含量的试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂与R3试剂，所述R1试剂包括偶联有链霉亲和素的磁微粒，所述R2试剂包括生物素标记的凝血酶抗体，所述R3试剂包括碱性磷酸酶标记的抗凝血酶抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为超顺磁微粒，表面覆盖有羧基官能团，粒径为1.0‑3.0µm。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括用于保存偶联有链霉亲和素的磁微粒的第一保存液，所述第一保存液包括以下质量百分比的组分：0.5‑1.0%氯化钠、0.5‑5.0%牛血清白蛋白、0.1‑2.0%丙三醇、0.1‑1.0%聚乙二醇6000、0.05‑1.0%AFP134抗冻蛋白、0.1‑1.0%黄原胶、0.1‑1.0%海藻糖、0.01‑0.05%Proclin300，余量为200‑600mM的Tris‑HCl缓冲液，所述第一保存液的pH为7.2‑7.4。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂还包括用于保存生物素标记的凝血酶抗体的第二保存液，所述第二保存液包括以下质量百分比的组分：0.5‑1.0%氯化钠、0.5‑5.0%牛血清白蛋白、0.1‑1.0%聚乙二醇6000、0.05‑1.0%AFP134抗冻蛋白、0.1‑1.0%黄原胶、0.1‑2.0%甘露醇、0.1‑1.0%海藻糖、0.01‑0.05%Proclin300，余量为30‑100mM的HEPES缓冲液，所述第二保存液的pH为7.0‑7.4。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R3试剂还包括用于保存碱性磷酸酶标记的抗凝血酶抗体的第三保存液，所述第三保存液包括以下质量百分比的组分：0.5‑1.0%氯化钠、0.5‑5.0%牛血清白蛋白、0.1‑1.0%聚乙二醇6000、0.05‑1.0%AFP134抗冻蛋白、0.1‑1.0%黄原胶、0.1‑2.0%甘露醇、0.1‑1.0%海藻糖、0.01‑0.05%Proclin300，余量为20‑70mM的HEPES缓冲液，所述第三保存液的pH为7.0‑7.4。6.一种权利要求1‑5任意一项所述的测定TAT含量的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将经过羧基修饰的微粒溶液在磁场作用下磁分离，去上清，用活化缓冲液清洗，然后洗涤后的磁微粒用活化缓冲液重悬后加入第一活化剂活化，得到活化磁微粒；S2、取活化磁微粒、链霉亲和素按比例混匀，混合后加入封闭液，得到偶联有链霉亲和素的磁性微粒，放至第一保存液中保存，得到R1试剂；S3、取凝血酶抗体、生物素分别与第二活化剂、第三活化剂进行活化，将活化后的凝血酶抗体、活化后的生物素按比例混匀，得到生物素标记的凝血酶抗体，放至到第二保存液中保存，得到R2试剂；S4、取抗凝血酶抗体、碱性磷酸酶分别与第四活化剂、第五活化剂混合反应，得到活化后的抗凝血酶抗体、活化后的碱性磷酸酶，将两者按比例混合，得到活化碱性磷酸酶标记的抗凝血酶抗体，放至到第三保存液中保存，得到R3试剂；S5、将R1试剂、R2试剂、R3试剂组装，得到试剂盒。7.根据权利要求6所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述活化缓冲液为2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸，