一种测定血栓调节蛋白含量的试剂盒及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114705868A(43)申请公布日2022.07.05(21)申请号202210609230.2G01N33/532(2006.01)(22)申请日2022.05.31G01N33/531(2006.01)(71)申请人深圳市帝迈生物技术有限公司地址518000广东省深圳市光明区玉塘街道田寮社区光侨路高科创新中心B座10层(72)发明人韩学娉(74)专利代理机构深圳市瑞方达知识产权事务所(普通合伙)44314专利代理师张秋红(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图1页(54)发明名称一种测定血栓调节蛋白含量的试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种测定血栓调节蛋白含量的试剂盒及其制备方法，试剂盒包括R1、R2与R3试剂，R1试剂包括磁微粒标记的血栓调节蛋白抗体，R2试剂包括碱性磷酸酶标记的血栓调节蛋白抗体，R3试剂包括发光底物；方法包括以下步骤：将羧基修饰的微粒活化得到活化磁微粒；取活化磁微粒、血栓调节蛋白抗体混匀，得到磁微粒标记的血栓调节蛋白抗体；取活化后的血栓调节蛋白抗体、碱性磷酸酶混匀，得到碱性磷酸酶标记的血栓调节蛋白抗体；取发光底物；本发明用磁微粒作为载体，提供了近似于均相的反应体系，选用碱性磷酸酶为标记物，具有反应快速、检测结果准确、使用方法简单、测定灵敏度高、特异性强、试剂稳定性好的优点。CN114705868ACN114705868A权利要求书1/2页1.一种测定血栓调节蛋白含量的试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂与R3试剂，所述R1试剂包括磁微粒标记的血栓调节蛋白抗体，所述R2试剂包括碱性磷酸酶标记的血栓调节蛋白抗体，所述R3试剂包括发光底物。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为超顺磁微粒，表面覆盖有羧基官能团，粒径为1.0‑3.0µm。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括用于保存磁微粒标记的血栓调节蛋白抗体的第一保存液，所述第一保存液包括以下质量百分比的组分：0.5‑1.0%氯化钠、0.5‑5.0%牛血清白蛋白、0.1‑2.0%丙三醇、0.1‑1.0%聚乙二醇6000、0.05‑1.0%AFP134抗冻蛋白、0.05‑1.0%黄原胶、0.01‑0.05%Proclin300，余量为200‑600mM的Tris‑HCl缓冲液，所述第一保存液的pH为7.2‑7.4。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂还包括用于保存碱性磷酸酶标记的血栓调节蛋白抗体的第二保存液，所述第二保存液包括以下质量百分比的组分：0.5‑1.0%氯化钠、0.5‑5.0%牛血清白蛋白、0.1‑1.0%聚乙二醇6000、0.05‑1.0%AFP134抗冻蛋白、0.05‑1.0%黄原胶、0.1‑2.0%甘露醇、0.01‑0.05%Proclin300，余量为30‑100mM的HEPES缓冲液，所述第二保存液的pH为7.0‑7.4。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R3试剂还包括用于保存发光底物的第三保存液，所述第三保存液包括以下质量百分比的组分：0.2‑0.8%氯化钠、0.001‑0.005%Na2SO3、0.001‑0.085%的0.1‑0.5mM没食子酸、0.01‑0.05%Proclin300，余量为20‑70mM的Tris‑Hcl缓冲液，所述第三保存液的pH为7.8‑8.3。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述发光底物为Lumi‑PhosPlus。7.一种权利要求1‑6任意一项所述的测定血栓调节蛋白含量的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将经过羧基修饰的微粒溶液在磁场作用下磁分离，去上清，用活化缓冲液清洗，洗涤后的磁微粒用活化缓冲液重悬后加入第一活化剂进行活化，得到活化磁微粒；S2、取活化磁微粒、血栓调节蛋白抗体按比例混匀，得到磁微粒标记的血栓调节蛋白抗体，放至第一保存液中保存，得到R1试剂；S3、取血栓调节蛋白抗体、碱性磷酸酶分别与第二活化剂、第三活化剂进行活化，将活化后的碱性磷酸酶、活化后的血栓调节蛋白抗体按比例混匀，得到碱性磷酸酶标记的血栓调节蛋白抗体，放至第二保存液中保存，得到R2试剂；S4、取发光底物，放至第三保存液中，得到R3试剂；S5、将R1试剂、R2试剂、R3试剂组装，得到试剂盒。8.根据权利要求7所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述活化缓冲液为2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸，浓度为10‑100mM，pH为5.4‑6.2。9.根据权利要求7所述的试剂盒的制备方法，其特征在