一种抗坏血酸含量测定试剂盒及其方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105651878A(43)申请公布日2016.06.08(21)申请号201511018690.4(22)申请日2015.12.31(71)申请人苏州科铭生物技术有限公司地址215000江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A3楼101B室(72)发明人赵林川(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272代理人夏海天(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/24(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种抗坏血酸含量测定试剂盒及其方法(57)摘要本发明公开了一种抗坏血酸含量测定试剂盒及其方法，该试剂盒包含的试剂有：由偏磷酸溶于蒸馏水后配制而成的试剂一，由磷酸组成的试剂二，以及由L-抗坏血酸组成的试剂三。本发明的样本前处理过程快速，可以有效地保留样本中抗坏血酸，而且提取液成分简单，仅用1%的偏磷酸溶液即可，成本极低。本发明的方法采用紫外检测器，通过保留时间定性、峰面积定量，测定结果更加准确。本发明的测定步骤只需要在测定前简单配制试剂一和试剂二，操作简单，非专业人士也能实施。本发明的方法在自动进样器的辅助下可以连续进样，适用于样本的批量测定，节省测定时间和人力。CN105651878ACN105651878A权利要求书1/1页1.一种抗坏血酸含量测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：试剂一，液体×1瓶，4℃保存，由偏磷酸溶于蒸馏水后配制而成，置于120mL试剂瓶中；试剂二，液体×1瓶，4℃保存，由磷酸组成，置于5mL试剂瓶中；试剂三，维生素C标准品×1支，-20℃保存，由L-抗坏血酸组成，置于1.5mLEP管中。2.根据权利要求1所述的抗坏血酸含量测定试剂盒，其特征在于：所述试剂一中，偏磷酸的质量为0.8g，蒸馏水的体积为80mL；所述试剂二中，磷酸的体积为5mL；所述试剂三中，L-抗坏血酸的质量为0.5mg。3.一种采用如权利要求2所述的试剂盒的抗坏血酸含量测定方法，其特征在于，基于高效液相色谱法，包括以下步骤：步骤1仪器和用品的准备；高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、涡旋震荡器、水系针头式过滤器、水系滤膜、有机系滤膜、C18柱、可调式移液器、样品瓶、内衬管、色谱级甲醇和超纯水；步骤2溶剂的除杂处理；将500mL超纯水用0.45μm的水系滤膜抽滤，将200mL甲醇用0.45μm的有机系滤膜抽滤，分别除去超纯水和甲醇中的杂质，以防止堵塞色谱柱；步骤3流动相的配制；取100mL除杂后的甲醇和400mL除杂后的超纯水混合，并加入0.5mL所述试剂二，混匀，配成流动相；步骤4溶剂的脱泡；将配好的流动相超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱；步骤5抗坏血酸的提取；称取0.1g样本，加入1mL所述试剂一，冰浴匀浆，采用离心率8000g离心10min，取上清液，用所述试剂一定容至1mL，混匀，使用针头式过滤器过滤后待测；步骤6标准品的配制；在所述试剂三中加入1mL所述试剂一，配成500μg/mL的母液，将母液用所述试剂一分别稀释成40μg/mL、30μg/mL、20μg/mL和10μg/mL的抗坏血酸标准品溶液，分别将四组不同浓度的抗坏血酸标准品溶液采用针头式过滤器过滤后待测；步骤7抗坏血酸含量测定操作步骤；1）开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量10μL，流速0.6mL/min，柱温25℃，保留时间10min，检测波长254nm，设置完毕保存方法组；2）启动输液泵，使流动相通过色谱柱，待基线稳定后开始加样；3）分别加入四组不同浓度的抗坏血酸标准品溶液10μL，在10min内可分离抗坏血酸，抗坏血酸的保留时间为5min，计算四组不同浓度的抗坏血酸标准品的峰面积；4）加入样品10μL，在相应保留时间处检测抗坏血酸的峰面积；步骤8抗坏血酸含量的计算；以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标计算抗坏血酸标准曲线，将样品峰面积代入标准曲线，计算出样品抗坏血酸的含量。2CN105651878A说明书1/4页一种抗坏血酸含量测定试剂盒及其方法技术领域[0001]本发明属于生命科学领域领域，涉及一种试剂盒，具体涉及一种抗坏血酸含量测定试剂盒及其方法。背景技术[0002]维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质，在人和动物生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维生素大致可分为脂溶性和水溶性两大类，水溶性维生素主要包括维生素B1、维生素B2、抗坏血酸等。[0003]抗坏血酸（AsA）即维生素C，在生物体内，抗坏血酸是一种抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁，抗坏血酸同时也是一种辅酶。目前市面已有的检测抗坏血酸的方法为