一种测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106198415A(43)申请公布日2016.12.07(21)申请号201610547124.0(22)申请日2016.07.12(71)申请人安徽伊普诺康生物技术股份有限公司地址230000安徽省合肥市包河工业区大连路与北京路交叉口西南角合肥华云印务有限公司综合东楼一至五层(72)发明人蔡晓辉庄庆华吴铮徐运(74)专利代理机构杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙)33240代理人王桂名(51)Int.Cl.G01N21/31(2006.01)权利要求书3页说明书9页(54)发明名称一种测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和试剂R3三液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：胶乳甘氨酸缓冲液、聚乙二醇-2000、吐温-80、甘油、牛血清白蛋白、叠氮钠，试剂R2：甘氨酸缓冲液、抗IgG抗体、抗HbA1c抗体、氯化钠、牛血清白蛋白、叠氮钠，试剂R3：溶血素稀释液，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本和试剂R3混合在一起，使用溶血素稀释液对待测样本进行处理；将处理后的待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的糖化血红蛋白的浓度。本发明具有准确度高、操作方便等优点。CN106198415ACN106198415A权利要求书1/3页1.一种测定糖化血红蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和试剂R3三液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：胶乳甘氨酸缓冲液15~185mmol/L聚乙二醇-20005~25g/L吐温-801.0~5.0ml/L甘油10~30mmol/L牛血清白蛋白20~60g/L叠氮钠0.3~0.9g/L其溶剂为纯化水试剂R2：甘氨酸缓冲液50~150mmol/L抗IgG抗体5~16g/L抗HbA1c抗体8~15g/L氯化钠150~250mmol/L牛血清白蛋白10~35g/L叠氮钠0.2~0.9g/L其溶剂为纯化水试剂R3：溶血素稀释液45~55mmol/L其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的一种测定糖化血红蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和试剂R3三液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：胶乳甘氨酸缓冲液100mmol/L聚乙二醇-200015g/L吐温-803.0ml/L甘油20mmol/L牛血清白蛋白40g/L叠氮钠0.6g/L其溶剂为纯化水试剂R2：甘氨酸缓冲液100mmol/L抗IgG抗体10g/L抗HbA1c抗体10g/L氯化钠200mmol/L牛血清白蛋白20g/L叠氮钠0.5g/L其溶剂为纯化水2CN106198415A权利要求书2/3页试剂R3：溶血素稀释液50mmol/L其溶剂为纯化水。3.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血红蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的胶乳甘氨酸缓冲液的配制方法为：（1）称取甘氨酸溶于纯化水中，搅拌均匀，配制成100mmol/L甘氨酸缓冲液备用；（2）选择粒径为40-500nm的聚苯乙烯微球，用步骤（1）所制得的甘氨酸缓冲液分散聚苯乙烯微球，制备得到所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液；（3）向上述步骤（2）中制得的溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，其中每毫升溶液中加入0.5mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应2小时，使用离心机，在15000rmp/min的转速下离心30分钟，弃上清，再将沉淀溶于100mmol/L甘氨酸缓冲液中，使得所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%，超声分散，然后再使用离心机，在15000rmp/min的转速下离心30分钟，弃上清，再将沉淀溶于100mmol/L甘氨酸缓冲液中，使得所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%，超声分散，再使用离心机，在15000rmp/min的转速下离心30分钟，最后去上清，分离得到沉淀物；（4）用步骤（1）制得的甘氨酸缓冲液稀释血红蛋白吸附剂，制备得到所含的血红蛋白吸附剂的质量浓度为1%-5%的溶液；（5）最后将步骤（3）分离出的沉淀物溶于步骤（4）所制得的含有血红蛋白吸附剂的溶液中即可，使得聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%为止，在20℃-37℃的条件下封闭24小时即可制备得到胶乳甘氨酸缓冲液。4.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血红蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：胶乳甘氨酸缓冲液15~185mmol/L聚乙二醇-20005~25g