一种软骨脱细胞基质及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114796615A(43)申请公布日2022.07.29(21)申请号202210416976.1(22)申请日2022.04.20(71)申请人诺一迈尔（苏州）医学科技有限公司地址215163江苏省苏州市高新区锦峰路8号11号楼301室(72)发明人李啸宏陈维明刘昌俊(74)专利代理机构常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙)32231专利代理师林琳(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图4页(54)发明名称一种软骨脱细胞基质及其制备方法(57)摘要本发明提供一种软骨脱细胞基质及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：使用酶类溶液对洁净软骨进行处理；使用非离子型试剂对浅层的细胞成分进行去除；使用离子型试剂对深层的细胞成分进行初步去除；使用两性离子型试剂对深层的细胞成分进行二次去除；使用纯化水进行清洗，得到脱细胞后的软骨材料；使用有机溶剂进行脱脂处理，得到脱脂后的软骨材料；对脱脂后的软骨材料进行病毒灭活得到灭活后的软骨材料；对灭活后的软骨材料进行冷冻干燥，得到软骨脱细胞基质。本发明提供的软骨脱细胞基质的制备方法，软骨材料不需要进行破坏重建，在不破坏软骨本身结构的情况下获得软骨脱细胞基质，很好的保护了软骨材料本身的Ⅱ型胶原网络。CN114796615ACN114796615A权利要求书1/2页1.一种软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：取哺乳动物的软骨，对所述软骨进行预处理，得到洁净软骨；S2：使用酶类溶液对所述洁净软骨进行处理，打开所述洁净软骨表层的孔隙结构，得到软骨材料A；S3：使用非离子型试剂对所述软骨材料A浅层的细胞成分进行去除，得到软骨材料B；S4：使用离子型试剂对所述软骨材料B深层的细胞成分进行初步去除，得到软骨材料C；S5：使用两性离子型试剂对所述软骨材料C深层的细胞成分进行二次去除，得到软骨材料D；S6：使用纯化水对所述软骨材料D进行清洗，得到脱细胞后的软骨材料；S7：使用有机溶剂对所述脱细胞后的软骨材料进行脱脂处理，得到脱脂后的软骨材料；S8：对所述脱脂后的软骨材料进行病毒灭活，得到灭活后的软骨材料；S9：对所述灭活后的软骨材料进行冷冻干燥，得到软骨脱细胞基质。2.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，步骤S1中对所述软骨进行预处理包括：使用刀具去除所述软骨表面的肉及骨膜，再使用纯化水对所述软骨进行清洗。3.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，步骤S2中的所述酶类溶液包括胰酶溶液；使用酶类溶液对所述洁净软骨进行处理包括：使用质量浓度为1％的胰酶溶液对所述洁净软骨进行消化，在气浴恒温震荡箱中于37℃、料液比1：10、转速120r条件下，震荡8‑12h。4.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，步骤S3中的所述非离子型试剂包括TritonX‑100/乙醇溶液；使用非离子型试剂对所述软骨材料A浅层的细胞成分进行去除包括：使用质量浓度为1％的TritonX‑100/乙醇溶液消化所述软骨材料A，在气浴恒温震荡箱中于25℃、料液比1：10、转速200r条件下，震荡14‑17h。5.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，步骤S4中的所述离子型试剂包括脱氧胆酸钠缓冲液；使用离子型试剂对所述软骨材料B深层的细胞成分进行初步去除包括：使用质量浓度为1％的脱氧胆酸钠缓冲液处理所述软骨材料B，在气浴恒温震荡箱中于25℃、料液比1：10、转速200r条件下，震荡4‑6h。6.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，步骤S5中的所述两性离子型试剂为CHAPS缓冲液；使用两性离子型试剂对所述软骨材料C深层的细胞成分进行二次去除包括：使用质量浓度为4％的CHAPS缓冲液处理所述软骨材料C，在气浴恒温震荡箱中于25℃、料液比1：10、转速160r条件下，震荡14‑17h。7.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，使用有机溶剂对所述脱细胞后的软骨材料进行脱脂处理包括：将所述脱细胞后的软骨材料置于有机溶剂中震荡脱脂3次，随后用纯化水进行洗涤；所述震荡脱脂包括：在气浴恒温震荡箱中于25℃、料液比1：10、转速120r条件下，震荡2h。8.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，对所述灭活后的软骨材料进行冷冻干燥包括：将所述灭活后的软骨材料置于‑20℃的冰箱中冷冻2h，随后置于真空冷冻干燥机中，于‑64℃、10pa的条件下干燥处理24h。9.如权利要求1～8任一项所述的软骨脱细胞基质的制备方法，其特征在于，还包括：2CN114796615A权利要求书2/2页S10：