一种脱细胞神经基质及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109602954A(43)申请公布日2019.04.12(21)申请号201811545274.3(22)申请日2018.12.17(71)申请人浙江华臻医疗器械有限公司地址325011浙江省温州市高新技术产业开发区创业服务中心科技企业孵化器中试大楼东边501室B-6(72)发明人赵子建王建英李芳红潘璐琪冯文金史啟(74)专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人李静(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书1页说明书14页附图2页(54)发明名称一种脱细胞神经基质及其制备方法(57)摘要本发明涉及组织工程材料技术领域，具体涉及一种脱细胞神经基质及其制备方法，制备方法为：将神经组织依次通过低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理，制得神经基质，本发明制备的脱细胞神经基质能够最大限度地保留神经细胞基质本身的三维结构，具有良好的机械性能，而且不需要外加交联剂进行物理或者化学交联，免疫原性低、毒性低，而且制备方法简单，稳定可靠，成本较低，适宜产业化生产。CN109602954ACN109602954A权利要求书1/1页1.一种脱细胞神经基质的制备方法，其特征在于，将神经组织依次通过低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理，制得神经基质。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在低渗处理中，将神经组织加入低渗溶液中孵育，孵育温度为2-6℃，孵育时间为15-30h；优选地，所述低渗溶液为超纯水。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在胰蛋白酶处理中，将神经组织加入胰蛋白酶溶液中，在37℃下水浴加热0.5-3h；优选地，所述胰蛋白酶溶液为含0.1-0.5％(m/v)胰蛋白酶和0.01-0.05％(m/v)EDTA的PBS溶液。4.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于，在去污剂处理中，将神经组织加入去污剂溶液中，在温度为15-25℃下振荡处理15-30h；优选地，以含0.05-0.3％SDS和0.05-0.3％(m/v)EDTA的的PBS溶液为去污剂溶液或含0.2-3％Triton-X100(v/v)和0.05-0.3％(m/v)EDTA的的PBS溶液为去污剂溶液。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述去污剂处理为使用两种去污剂溶液分两次处理，第一次处理中，采用含0.05-0.3％SDS和0.05-0.3％(m/v)EDTA的PBS溶液为去污剂溶液，第二次处理中，采用含0.2-3％Triton-X100(v/v)和0.05-0.3％(m/v)EDTA的PBS溶液为去污剂溶液；优选地，在所述去污剂处理之后还包括α-1,3-半乳糖苷酶溶液处理，在α-1,3-半乳糖苷酶溶液处理中，将神经组织加入含10-40μg/mLα-1,3-半乳糖苷酶的PBS溶液中，在25-37℃浸泡1-6小时。6.根据权利要求1-5中任一所述的制备方法，其特征在于，在核酸酶处理中，将神经组织加入缓冲细胞液中，然后加入30-60U/ml的DNA酶和0.5-4U/ml的RNA酶，在35-40℃下水浴加热1-6h。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲细胞液为含5-30mM氯化镁的Tris-Hcl溶液，所述Tris-Hcl溶液的浓度为30-60mM，pH为7-8。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在核酸酶处理之后还包括灭菌处理；优选地，在灭菌处理中，将神经组织加入消毒液中浸泡1-6h，所述消毒液为含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4wt％次氯酸钠的PBS溶液，或含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4vt％84消毒液的PBS溶液。9.根据权利要求1-8所述的制备方法，其特征在于，神经组织在低渗处理之前还包括前清洗处理；在低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理之后还包括中间清洗处理；在核酸酶处理之后还包括后清洗处理；优选地，在前清洗处理中，将神经组织加入生理盐水中浸泡，然后加入超纯水中超声清洗，再用超纯水持续冲洗；优选地，在中间清洗处理中，将神经组织加入超纯水中超声清洗，再用超纯水持续冲洗；优选地，在后清洗处理中，将神经组织加入无菌PBS中浸泡。10.一种权利要求1-9中任一所述的制备方法制得的脱细胞神经基质。2CN109602954A说明书1/14页一种脱细胞神经基质及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及组织工程材料技术领域，具体涉及一种脱细胞神经基质及其制备方法。背景技术[0002]神经系统是机体内对生理功能活动的调节起到主导作用的系统，主要由神经组织组成，分为中枢神经系统和周围神经系统两大部分，中枢神经系