一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114796616A(43)申请公布日2022.07.29(21)申请号202210487580.6A61L27/54(2006.01)(22)申请日2022.05.06(71)申请人广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心）地址510120广东省广州市越秀区沿江路151号(72)发明人张姝江白波谢慧锋陈艺姚咏嫦周伟钱东阳郑仕聪(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师赵崇杨(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/20(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法(57)摘要本发明公开了一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法。本发明方法制备得到软骨支架的仅适用于软骨修复，采用猪软骨来制备脱细胞软骨海绵基质，含有2型胶原，并保留了大量软骨基质本身的蛋白聚糖成分和生物活性因子，利用动物软骨制备脱细胞胶原基质，能够一定程度上模拟软骨的基本结构；采用壳聚糖作为原料，通过优化使用比例，使支架的力学条件更加稳固，同时具有良好的生物相容性和弹性。本发明不采用交联剂也可以很好的保存脱细胞基质里的活性生物因子，也能具有良好的细胞相容性，构成的支架有较好的孔隙率，利于细胞的三维生长和增殖分化，获得最适宜用于组织工程软骨的复合支架。CN114796616ACN114796616A权利要求书1/1页1.一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.提取关节软骨组织：选取猪膝关节，进行冲洗后剥离软骨组织，并将软骨组织切碎、冻干、粉碎，得到软骨粉末；S2.软骨粉末脱细胞处理：在步骤S1制备得到的软骨粉末中添加表面活性剂和蛋白酶阻断剂，脱细胞后漂洗，收集沉淀；S3.向步骤S2的沉淀中加入核酸酶，消化，漂洗，再收集沉淀，冻干，即得软骨脱细胞基质；S4.复合支架的制作：将步骤S3制备得到的软骨脱细胞基质配制为混悬液；再将软骨脱细胞基质混悬液和壳聚糖水凝胶添加到支架模具中，混合后冻干处理，即得透明软骨脱细胞基质复合支架。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S1的软骨粉末粒径为100μm以下。3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S1中冻干先将软骨组织碎片于‑70～‑90℃预冻8～10h后，再进行冻干12～16h。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S2中采用的表面活性剂和蛋白酶阻断剂为TritonX‑100和苯甲基磺酰氟。5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S2中脱细胞条件为：0～5℃，90～100rpm/min，10～14h。6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S3中的核酸酶采用50μ/mlDNA酶和1μ/mlRNA酶。7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S5中的软骨脱细胞基质混悬液的质量分数为9.99～10.01％，所述壳聚糖水凝胶的质量体积浓度为0.99％～1.01％。8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤S5中软骨脱细胞基质混悬液和壳聚糖水凝胶的体积比为1～15:1；优选地，所述软骨脱细胞基质混悬液和壳聚糖水凝胶的体积比为10:1。9.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S5中冻干为在‑70～‑90℃预冻8～10h后，再冻干6～9h。10.一种透明软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于，由权利要求1～9任一所述方法制备得到。2CN114796616A说明书1/7页一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及一种透明软骨脱细胞基质复合支架的制备方法。背景技术[0002]关节软骨(articularcartilage)在关节中相连骨的表面，覆有一层关节软骨，或为透明软骨，或为纤维软骨。剧烈运动造成的软骨损伤以及机体衰老产生的软骨退化已成为骨科临床治疗中经常面临的问题。由于软骨组织自身无血管、无淋巴，使得软骨组织损伤后自修复能力十分困难，目前，组织工程化软骨移植修复是关节软骨修复的治疗方法之一。软骨组织工程是将软骨种子种植于可生物降解、组织相容性好的生物材料形成复合物，然后再把该复合物植入软骨缺损处，生物材料自行降解的过程中，种植的细胞形成新的软骨来填充缺损。[0003]目前对于关节软骨的研究多采用高分子材料或是Ⅰ型或Ⅱ型胶原海绵等支架进行软骨缺损修复，由于医用高分子材料生物相容性差且其降解产物对组织有破坏性，而单一的胶原海绵力学性能差，还可能会导致软骨骨化，采用多层结构存在形态不稳定容易造成层分离等现象。可见，不同的生物材料制备软骨支架还存在一定的缺陷。现有技术中制备软骨支架常