一种脱细胞血管基质及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113521394A(43)申请公布日2021.10.22(21)申请号202010286089.8(22)申请日2020.04.13(71)申请人浙江华臻医疗器械有限公司地址325000浙江省温州市高新技术产业开发区创业服务中心科技企业孵化器中试大楼东边501室B-6(自主申报)(72)发明人赵子建王建英(74)专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人李静(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一种脱细胞血管基质及其制备方法(57)摘要本发明涉及组织工程领域，具体涉及一种脱细胞血管基质及其制备方法，在脱细胞处理步骤中，使用含有[9,9'-二-9H-芴]-9,9'-二甲醛的工作液孵育待用血管组织器官，以脱除细胞，在减少脱细胞所需的时间中有巨大的应用潜力，并且可以在完全去除血管外膜、中膜及内膜中的所有细胞时，并保留完整的三维结构及细胞外基质组分，具有低免疫原性、低细胞毒性和良好的力学性能。CN113521394ACN113521394A权利要求书1/1页1.一种脱细胞血管基质制备方法，其特征在于，在脱细胞处理步骤中，使用含有[9,9'-二-9H-芴]-9,9'-二甲醛的工作液孵育待用血管组织器官，以脱除细胞。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述工作液中[9,9'-二-9H-芴]-9,9'-二甲醛的浓度为10μmol/L-20μmol/L。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述工作液中还包括细胞培养基。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述工作液的制备方法包括：将[9,9’-二-9H-芴]-9,9’-二甲醛溶于有机溶剂中，得到母液；向所得的母液中加入细胞培养基，将[9,9’-二-9H-芴]-9,9’-二甲醛稀释至设定浓度。5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在脱细胞步骤中，孵育条件为室温下孵育24h-48h。6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，包括：将待用血管组织器官进行预处理；脱细胞处理；清洗处理；高渗-低渗处理，清洗，重复高渗-低渗处理至少一次；核酸处理；清洗处理；消毒处理。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述核酸处理步骤中，将待用血管组织器官置于脱氧核糖核酸酶I溶液中孵育6-12小时，孵育温度为37℃；所述脱氧核糖核酸酶I溶液为含160U/ml-320U/ml脱氧核糖核酸酶I，10mM-20mM氯化镁且pH为7.5的50mMTris-Hcl溶液。8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述消毒处理步骤为将待用血管组织器官置于体积百分比为75％的酒精中浸泡20-40分钟，然后在PBS中振荡清洗10-14小时，温度为37℃，循环清洗3-5次。9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述清洗步骤中，将待用血管组织器官超声清洗1-3次，每次5-10分钟，超声条件为频率25KHZ-45KHZ,温度37℃-45℃。10.一种如权利要求1-9任一项所述的制备方法制备得到的异种脱细胞基质。2CN113521394A说明书1/10页一种脱细胞血管基质及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及组织工程领域，具体涉及一种脱细胞血管基质及其制备方法。背景技术[0002]调查显示心血管疾病是全球病患死亡的首要原因。目前，心血管疾病的主要治疗手段主要有以下4种，即药物治疗、调整生活习惯、介入治疗和冠状动脉旁路移植术。其中，冠状动脉旁路移植术所用的桥血管主要有自体血管和人工血管。自体血管是血管旁路移植材料的金标准，常用的自体血管主要有内乳动脉，挠动脉和大隐静脉，但自体血管来源有限，且给患者带来二次创伤，此外，许多患者由于存在其他血管疾病，导致无正常的血管可供自体移植。人工血管主要有三种：异种脱细胞基质，天然高分子材料(胶原，明胶和壳聚糖等)，和合成高分子材料(尼龙、涤纶和聚四氟乙烯)。高分子材料制备的人工血管对高流量低阻力血管如胸腹主动脉等大血管具有良好的临床效果。然而由高分子材料制备的小直径血管弹性和顺应性差，缺乏抗血栓表面，导致构建的小直径血管(<6mm)持续受到内膜增生和血栓形成等问题的困扰。应用物理或化学方法将异种组织进行脱细胞处理，去除组织移植过程中引起排斥反应的细胞成分，保留细胞外基质(ECM)成分和完整的支架结构的异种脱细胞基质已广泛用于真皮、心脏瓣膜等生物组织，并已经取得了不错的临床效果，且由于其具有来源丰富、价格低廉的优势，因此，近年来脱细胞组织基质作为修复损伤组织的一种新型修复材料，在组织工程中越来越受到重视。[0003]ECM成分包