利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108333267A(43)申请公布日2018.07.27(21)申请号201810065424.4(22)申请日2018.01.23(71)申请人广州铭康生物工程有限公司地址510530广东省广州市经济技术开发区金峰园路1号(72)发明人赵宇清何志辉霍碧桃张毛秀穆国会曹靖文(74)专利代理机构广州胜沃园专利代理有限公司44416代理人孙文卉(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图7页(54)发明名称利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法(57)摘要本发明属于生物医药领域，具体涉及利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法。其色谱条件为：色谱柱：C8柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液：乙腈＝(20～60)：(30～80)；检测波长：200～220mm；柱温：30～35℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl。本发明方法特别适用于测定铭复乐中精氨酸含量，其无需柱前/柱后衍生化，且具有准确度、精密度高、重复性良好、线性范围宽等特点，为铭复乐产品制定了一个科学、严格的内控标准，提高了铭复乐产品的质量。CN108333267ACN108333267A权利要求书1/1页1.利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法，其特征在于，其色谱条件为：色谱柱：C8丙烯酰胺键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液：乙腈＝(20～60)：(30～80)；检测波长：200～220mm；柱温：30～35℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，每瓶所述铭复乐中精氨酸含量为165±0.1～0.5mg。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.0～8.0。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相为磷酸二氢钾溶液：乙腈＝(20～50)：(40～80)，以体积份数计。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相为磷酸二氢钾溶液：乙腈＝40：60，以体积份数计。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测波长为208mm。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为30℃。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：A)将样品用流动相溶解，得样品溶液；B)上述样品溶液注入高效液相色谱仪；C)记录色谱图，根据外标法计算样品中精氨酸的含量。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其色谱条件为：色谱柱：C8丙烯酰胺键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈＝40：60，以体积份数计；检测波长：208mm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述磷酸氢二钾溶液的pH为6.0～8.0。2CN108333267A说明书1/6页利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法技术领域[0001]本发明属于生物医药领域，具体涉及利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法。背景技术[0002]TNK-tPA是迄今为止最安全有效且使用最方便的溶栓药，国内上市的第一代重组天然tPA类产品，完全依赖进口，商品名“爱通立”，50mg/支，售价高达5717元。而采用大肠杆菌表达的第二tPA类产品，即瑞替普酶，由山东阿华生产的“瑞通立”和北京爱德药业开发的“派通欣”分别于2007年和2010年获准上市。而铭复乐是广州铭康生物工程有限公司生产的第三代tPA类产品，是目前唯一可以单次静脉推注的溶栓药品种，其具有一针救命，使用方便的特点，更加适合急救，使得溶栓治疗在院外进行成为可能，具有划时代的意义。而为了提高铭复乐的质量标准，极其需要建立制剂中辅料精氨酸含量的检验方法和控制要求。[0003]对于精氨酸含量的检测，2010版《中国药典》中公开了采用电位滴定法测定精氨酸的含量、采用旋光法测定盐酸精氨酸注射液中精氨酸的含量，但由于本品中精氨酸是作为辅料，含量较低，且存在主药和其他辅料的影响，故不宜采用电位滴定法或旋光法测定精氨酸的含量。[0004]现有技术中公开了众多测定注射制剂中氨基酸的含量的方法，如张彦文，张庆伟利用C18色谱柱测定了脑蛋白水解物注射液中各游离氨基酸的含量《脑蛋白水解物注射液的质量评价》。还有文献报道采用离子色谱法、氨基键合硅胶填充柱对注射制剂中氨基酸的含量进行检测，但均存在线性范围窄、图谱峰型较差、出峰时间短等问题。也有部分报道采用反相柱(C18、C8柱)柱前或柱后衍生化的方法，将其与衍生化实际反应后生成有紫外吸收的物质进行检测(脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量测定分析方法，龚继华，张泽辛，邱德清)，但是又存在重复性和准确度不够，操作繁琐，检测