利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112362768A(43)申请公布日2021.02.12(21)申请号202011148762.8G01N30/72(2006.01)(22)申请日2020.10.23G01N30/86(2006.01)(71)申请人北京民海生物科技有限公司地址102600北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地思邈路35号(72)发明人殷寻邓海清尹珊珊刘建凯(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人黄爽(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/30(2006.01)G01N30/32(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图4页(54)发明名称利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol185含量的方法(57)摘要本发明提供一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol185含量的方法，包括：A、配制不同浓度的Berol185标准品溶液，进行液相色谱串联质谱检测；并根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出定量离子；B、分别提取不同浓度标准品溶液的定量离子峰的峰面积，绘制峰面积‑浓度标准曲线；C、对样品进行预处理，然后采用A中的方法进行液相色谱串联质谱检测；D、根据样品的检测结果，对照标准曲线，获得样品中Berol185的浓度。本方法样品前处理简单，进样快，可实现对Berol185含量进行简单、快速、准确分析的目的，且该方法灵敏度好，回收率高，精密度和重现性好。CN112362768ACN112362768A权利要求书1/1页1.利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol185含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、配制不同浓度的Berol185标准品溶液，进行液相色谱串联质谱检测；并根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出定量离子；B、分别提取不同浓度标准品溶液的定量离子峰，并记录峰面积；以标准品溶液的浓度作为横坐标，以定量离子对应的峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线；C、对待测样品进行预处理，然后采用与步骤A相同的方法进行液相色谱串联质谱检测；D、根据待测样品的检测结果，对照标准曲线，获得待测样品中Berol185的浓度，从而实现对样品中Berol185的定量检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中用甲醇配制不同浓度的Berol185标准品溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C对待测样品进行预处理的方法包括：将待测样品与甲醇按体积比1:2-1:9混合，离心后取上清液进行液相色谱串联质谱检测。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱采用BioC18反向色谱柱；流动相A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；流速为0.25-0.35ml/min；柱温为25-35℃；采用梯度洗脱：0.00-1.00min5％B，2.01-5.00min40％B，5.01-7.00min99％B，7.01-9.00min99％B，9.01-9.10min40％B，9.11-15.00min5％B。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，质谱检测条件如下：利用三重四级杆质谱系统进行质谱检测：ESI电离源；正离子检测模式；雾化气流量：2.5-3L/min；接口温度：250-350℃；DL温度：200-280℃；加热块温度：350-450℃。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，Berol185标准品在质谱中所产生的检测信号的母离子具有630.05的质荷比，子离子包含质荷比为89.10、133.10和613.40的子离子。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，样品中Berol185的线性检测范围为5-120ppb，检出限为1ppb。8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包括生物制品，优选疫苗产品，更优选含有百日咳杆菌抗原的疫苗。9.权利要求1-8任一项所述方法在生物制品质量控制中的应用。2CN112362768A说明书1/11页利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol185含量的方法技术领域[0001]本发明涉及生物制品检测领域，具体地说，涉及一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol185含量的方法。背景技术[0002]Berol185，化学名C10-16脂肪醇聚氧乙烯聚氧丙烯醚，分子式为R-O-(C2H4O)n-(C3H6O)m-H：R＝CnH2n+1(n＝10-16)，是一种亲水性非离子表面活性剂，无紫外吸收，无荧光性，澄清液体，在1％水中的pH范围为5-7，溶于水、异丙醇、甲醇、乙醇。[0003]一方面，Berol185在百日咳疫苗生产过程中，加入该表面活性剂后内毒素含量的控制上