盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109813897A(43)申请公布日2019.05.28(21)申请号201711151053.3(22)申请日2017.11.18(71)申请人镇江亿特生物科技发展有限公司地址212009江苏省镇江市新区丁卯经十二路668号(72)发明人洪霞杜霞秦悦(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条(57)摘要本发明涉及盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条制备方法及其应用。该试纸条由Fusion5膜、硝酸纤维素膜和吸水纸三部分组成，通过竞争法原理，利用时间分辨荧光微球作为免疫标记物，对待测抗原进行准确快速的定量检测。CN109813897ACN109813897A权利要求书1/1页1.盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：包括Fusion5膜、硝酸纤维素膜以及吸水纸三部分，硝酸纤维素膜位于中间，Fusion5膜与吸水纸分别搭接于硝酸纤维素膜左右两端，Fusion5膜上有加样区和微球区，微球区上载有盐酸可乐定单克隆抗体时间分辨荧光微球；硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，检测线上包被盐酸可乐定抗原，质控线上包被抗兔抗体。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有盐酸可乐定单抗的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。3.如权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的粒径范围为100-1000nm。4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述检测线上包被盐酸可乐定检测用抗原为盐酸可乐定与载体物质形成的偶合物；检测线上包被二抗-抗兔抗体。5.如权利要求1所述的试纸条的制备方法，其制备步骤如下：⑴.质控微球制备：①用生物素标记蛋白；②采用上述标记蛋白包被醛基修饰的荧光微球；⑵.检测微球制备：采用盐酸可乐定的单抗包被醛基修饰的荧光微球；⑶.空白大卡粘贴：将硝酸纤维素膜粘贴在塑料底板中间，Fusion5膜与吸水纸分别搭接于硝酸纤维素膜左右两端；⑷.喷膜：将兔抗标记蛋白的荧光微球和盐酸可乐定单抗的荧光微球采用释放缓冲液混合稀释到一定浓度，喷到Fusion5膜的微球区；盐酸可乐定抗原和抗兔抗体稀释后，分别喷到硝酸纤维素膜的T线和C线位置；⑸干燥及切条。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤⑷中释放缓冲液组成为10-15%蔗糖、3-10%海藻糖、0.5-1%N，O-双三甲硅基乙酰胺（BSA）、0.1-0.5%庆大霉素。7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤⑷稀释后检测微球终浓度为0.5-3mg/mL，质控微球终浓度0.05-0.3mg/mL；T线抗原终浓度0.5-3mg/mL，C线抗原终浓度0.5-3mg/mL；C，T线喷膜液量为0.5-1.5μ1/cm，微球喷膜量为2-10μl/cm。8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤⑸中烘干条件为37℃烘干12-16小时。9.如权利要求5权利要求所述的盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：试纸条底部设有塑料底板。10.如权利要求1所述的试纸条的应用，其特征在于：该试纸条用于采用竞争法模式的免疫层析的定量检测。2CN109813897A说明书1/5页盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是盐酸可乐定定量检测的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。背景技术[0002]盐酸可乐定(Clonidinehydrochloride，分子式：C9H9Cl2N3∙HCl，分子量：266.56)是一种抗高血压药物，其药理作用主要为通过刺激脑干α2-肾上腺受体导致交感神经从中枢神经系统的传出减少，从而降低外周阻力、肾血管阻力、心率以及血压，其常见的副作用有口干、瞌睡、头晕、镇静、呼吸抑制等。食用含有可乐定残留的动物源性产品，对人体健康具有一定的危害性。农业部于2010年12月27日发布中国人民共和国农业部第1519号公告，禁止在饲料和动物饮水中使用盐酸可乐定。[0003]近年开始出现将盐酸可乐定用于促进动物生长和改善酮体组成的研究，推断其主要的作用机理为通过促进下丘脑生长腺素神经元合成和释放生长腺素，进而调节腺垂体细胞内cAMP水平，从而调控生长激素分泌，促进生猪生长。动物研究表明在猪饲粮中添加0.5mg/kg盐酸可乐定，能显著提高猪的瘦肉率和眼肌面积，降低脂肪比率和背膘厚，改善猪的胴体组成。[0004]检测动物尿液中盐酸可乐定的含量显得更直接、方便，且