一种定量检测血液中fPSA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108535484A(43)申请公布日2018.09.14(21)申请号201810732798.7(22)申请日2018.07.05(71)申请人深圳市迈科龙生物技术有限公司地址518000广东省深圳市南山区高新技术产业园高新南六道迈科龙大厦17楼(72)发明人唐盛刘小平夏琳常文伟(74)专利代理机构深圳市康弘知识产权代理有限公司44247代理人尹彦胡朝阳(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种定量检测血液中fPSA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法(57)摘要本发明涉及一种定量检测血液中fPSA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法。该试纸条是在白色PVC底板上依次相互交错2mm粘贴上NC膜、标记了fPSA抗体和鼠抗兔IgG的荧光微球结合物垫、样品垫、吸水垫，然后再用配套的上下两个塑料卡壳固定试纸条组装而成的测试卡，NC膜上预包有fPSA抗体检测线和兔IgG质控线，本发明将时间分辨荧光免疫层析技术引入到了血液中fPSA的定量检测中，不仅大大的节约了检测时间，提升了检测的稳定性和灵敏度，而且操作简便，可用于现场筛查；同时也具有成本便宜，性价比高的优点。CN108535484ACN108535484A权利要求书1/1页1.一种定量检测血液中fPSA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括PVC底板，底板上依次相互交错2mm粘贴上NC膜、标记了fPSA抗体和鼠抗兔IgG的荧光微球结合物垫、样品垫、吸水垫，所述NC膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有fPSA抗体，所述质控线上包被有兔IgG，所述检测条用配套的上下两个塑料卡壳固定。2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫、荧光微球结合物垫、反应膜和吸水垫在底板按顺序排列。3.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述fPSA抗体的终浓度为0.2mg/mL；所述鼠抗兔IgG抗体的终浓度为0.2mg/mL。4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为200nm。5.根据权利要求1-4任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球载有镧系元素或其螯合物，所述镧系元素优选为钐、铕或铽。6.根据权利要求1-5任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、结合物垫的处理：用定量喷液装置将结合物垫处理液以16μL/cm的量喷涂于结合物垫上后45℃烘干24小时；B、NC膜的制备：使用包被缓冲液分别将抗fPSA包被抗体以及兔IgG稀释到0.8mg/mL和1.0mg/mL浓度，使用定量喷液装置分别将两者以0.5-0.8cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，后于45℃烘干72小时，加入干燥剂封存备用；C、结合物垫的制备：选用直径为200nm的乳胶微球，使用碳二亚胺（EDC）共价偶联的方式将fPSA抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上；将制备好的乳胶微球使用定量喷液装置以8μL/cm的量喷涂于处理过的结合物垫上；D、试纸条的组装：在白色PVC底板上依次相互交错2mm地贴上NC膜、结合物垫、样品垫、吸水垫，即得到时间分辨荧光免疫层析试纸条。7.根据权利要求6所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤C中将fPSA抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上的步骤为：使用含有0.05mol/L的MES缓冲液洗涤乳胶微球，加入EDC和NHS，超声混匀置摇床避光孵育15min，离心20min去上清，用MES洗涤两次后加入抗体，置于摇床避光孵育3h，加入30％封闭液，置于摇床避光孵育1.5h，封闭完成后去上清，用MES洗涤两次，0.05%Tween-20，0.1%酪蛋白和0.5％BSA的50mmolTris-HclpH8.2的保存缓冲液，复溶乳胶微球，4℃保存备用；使用同样的方法将鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上，后用结合物稀释液将标记好的fPSA和鼠抗兔IgG抗体稀释。8.根据权利要求7所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，加入EDC和NHS使终浓度为分别为0.5mg/mL和5mg/mL。9.根据权利要求7所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述加入抗体使得抗体终浓度为0.2mg/mL。10.根据权利要求7所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述结合物稀释液以1:10～1:15的比例将标记好的fPSA和鼠抗兔IgG抗体稀释。2CN108535484A说明书1/7页一种定量检测血液中fPSA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法技术领域[0001]本发