一种检测盐酸可乐定的免疫层析试纸条的制备.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111366723A(43)申请公布日2020.07.03(21)申请号201811588307.2(22)申请日2018.12.25(71)申请人南京亿特生物科技有限公司地址211100江苏省南京市江宁区江宁科学园芝兰路18号(72)发明人杜霞秦悦袁超(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种检测盐酸可乐定的免疫层析试纸条的制备(57)摘要本发明盐酸可乐定的免疫胶体金检测卡及其制备方法,涉及β-肾上腺素受体激动剂检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含盐酸可乐定单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有盐酸可乐定蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测盐酸可乐定，方便、快捷、结果准确。CN111366723ACN111366723A权利要求书1/1页1.盐酸可乐定胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；(2)抗体的预处理：将要标记的盐酸可乐定抗体在1000r/min，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成盐酸可乐定单克隆抗体胶体金标记物；(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)盐酸可乐定蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含盐酸可乐定蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、盐酸可乐定蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2.根据权利要求1所述的盐酸可乐定胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白(BSA)和0.8g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。2CN111366723A说明书1/3页一种检测盐酸可乐定的免疫层析试纸条的制备技术领域[0001]本发明涉及动物源食品添加剂检测技术领域，特别是涉及盐酸可乐定的免疫胶体金检测卡及其制备方法。背景技术[0002]盐酸可乐定(Clonidinehydrochloride，分子式：C9H9Cl2N3∙HCl，分子量：266.56)是一种抗高血压药物，其药理作用主要为通过刺激脑干α2-肾上腺受体导致交感神经从中枢神经系统的传出减少，从而降低外周阻力、肾血管阻力、心率以及血压，其常见的副作用有口干、瞌睡、头晕、镇静、呼吸抑制等。食用含有可乐定残留的动物源性产品，对人体健康具有一定的危害性。农业部于2010年12月27日发布中国人民共和国农业部第1519号公告，禁止在饲料和动物饮水中使用盐酸可乐定。[0003]近年开始出现将盐酸可乐定用于促进动物生长和改善酮体组成的研究，推断其主要的作用机理为通过促进下丘脑生长腺素神经元合成和释放生长腺素，进而调