一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108535485A(43)申请公布日2018.09.14(21)申请号201810732799.1(22)申请日2018.07.05(71)申请人深圳市迈科龙生物技术有限公司地址518000广东省深圳市南山区高新技术产业园高新南六道迈科龙大厦17楼(72)发明人常文伟夏琳唐盛刘小平(74)专利代理机构深圳市康弘知识产权代理有限公司44247代理人尹彦胡朝阳(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图4页(54)发明名称一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法(57)摘要本发明涉及一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法。该试纸条是在白色PVC底板上依次相互交错2mm粘贴上NC膜、标记了CA153抗体和鼠抗兔IgG的荧光微球结合物垫、样品垫、吸水垫，然后再用配套的上下两个塑料卡壳固定试纸条组装而成的测试卡，NC膜上预包有CA153抗体检测线和兔IgG质控线，本发明将时间分辨荧光免疫层析技术引入到了血液中CA153的定量检测中，不仅大大的节约了检测时间，提升了检测的稳定性和灵敏度，而且操作简便，可用于现场筛查；同时也具有成本便宜，性价比高的优点。CN108535485ACN108535485A权利要求书1/2页1.一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板（7）和底板（7）上依次紧密连接的样品垫（1）、荧光微球结合物垫（2）、反应膜（3）和吸水垫（6），其中所述底板为PVC底板；所述荧光微球结合物垫上包被有CA153抗体和鼠抗兔IgG抗体；所述反应膜为硝酸维生素（NC）膜，所述NC膜上设有检测线（4）和质控线（5）；所述检测线（4）上包被有CA153抗体，所述质控线（5）上包被有兔IgG。2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫（1）、荧光微球结合物垫（2）、反应膜（3）和吸水垫（6）在底板（7）按顺序排列，其中，所述样本垫（1）与所述荧光微球结合物垫（2）部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/5～1/3；所述荧光微球结合物垫（2）与反应膜（3）有部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/5～1/3；所述反应膜（3）与吸水垫（6）有部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/10～1/5；所述检测线（4）和质控线（5）的长度占所述反应膜（3）长度的1/15～1/10；所述检测线（4）和样本垫（1）的距离占所述反应膜（3）长度的1/4～1/3；所述检测线（4）和质控线（5）之间的间距占所述反应膜的1/3～1/2。3.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述CA153抗体的终浓度为0.05～0.5mg/mL，优选为0.1～0.3mg/mL；所述鼠抗兔IgG抗体的终浓度0.05～0.5mg/mL，优选为0.1～0.3mg/mL。4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为50～500nm，优选地为100～300nm，更优选为200nm。5.根据权利要求1-4任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球载有镧系元素或其螯合物，所述镧系元素优选为钐、铕或铽。6.权利要求1-5任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、结合物垫的处理：用定量喷液装置将结合物垫处理液以16μL/cm的量喷涂于结合物垫上后45℃烘干24小时；B、NC膜的制备：使用包被缓冲液分别将抗CA153包被抗体以及兔IgG稀释到0.8mg/mL和1.0mg/mL浓度，使用定量喷液装置分别将两者以0.5-0.8cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，后于45℃烘干72小时，加入干燥剂封存备用；C、结合物垫的制备：选用直径为200nm的乳胶微球，使用碳二亚胺（EDC）共价偶联的方式将CA153抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上；将制备好的乳胶微球使用定量喷液装置以8μL/cm的量喷涂于处理过的结合物垫上；D、试纸条的组装：在白色PVC底板上依次相互交错2mm地贴上NC膜、结合物垫、样品垫、吸水垫，即得到时间分辨荧光免疫层析试纸条。7.根据权利要求6所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤C中将CA153抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上的步骤为：使用含有0.05mol/L的MES缓冲液洗涤乳胶微球，加入EDC和NHS使终浓度为分别为0.5mg/mL和5mg/mL，超声混匀置摇2CN108535485A权利要求书2/2页床避光孵育15min，离心20m