水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110658342A(43)申请公布日2020.01.07(21)申请号201910966456.6(22)申请日2019.10.12(71)申请人石家庄市畜产品质量监测中心地址050041河北省石家庄市长安区义西街3号申请人北京维德维康生物技术有限公司(72)发明人李云马立才赵义良刘河冰刘薇(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人白艳(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书3页说明书9页序列表2页附图1页(54)发明名称水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法(57)摘要本发明公开了水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法。本发明提供了检测试剂卡，包括底板和放置在其上的样品垫、含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫、含有氯霉素检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜，和吸水垫。本发明采用时间分辨荧光免疫分析技术建立了一种水产品中氯霉素残留量的快速检测方法，方法的检测灵敏度(定量限0.1μg/kg)优于传统的胶体金荧光免疫层析技术，达到了酶联免疫吸附方法和仪器方法的灵敏度水平。CN110658342ACN110658342A权利要求书1/3页1.一种氯霉素时间分辨荧光免疫检测试剂卡，包括底板和放置在其上的样品垫、含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫、含有氯霉素检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜，和吸水垫。2.根据权利要求1所述的试剂卡，其特征在于：所述抗氯霉素抗体为抗氯霉素单克隆抗体；所述抗氯霉素单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为1；所述抗氯霉素单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为2。3.根据权利要求2所述的试剂卡，其特征在于：所述含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫为将铕微球标记的抗氯霉素抗体溶液喷于释放垫上形成；所述铕微球标记的抗氯霉素抗体溶液的包被浓度为0.02mg/mL。4.根据权利要求3所述的试剂卡，其特征在于：所述铕微球标记的抗氯霉素抗体溶液中，所述抗氯霉素抗体和铕微球的质量比为1：25；或，所述铕微球为200nm羧基化铕微球。5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂卡，其特征在于：所述氯霉素检测线T由氯霉素抗原或其溶液形成；或，所述氯霉素抗原溶液的包被浓度具体为0.3mg/ml；或，所述质控线C由IgG抗体或IgG抗体溶液形成；或，所述IgG抗体溶液的包被浓度具体为0.875mg/mL；或，所述含有氯霉素检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜为将所述氯霉素抗原溶液包被在硝酸纤维素膜形成检测线T，且将所述IgG抗体溶液包被在硝酸纤维素膜形成质控线C，得到含有氯霉素检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜。6.一种制备权利要求1-5中任一所述的试剂卡的方法，包括如下步骤：先制备含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫和制备含有氯霉素检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；再将样品垫、所述含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫、所述含有氯霉素检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜和吸水垫组装到底板上，得到试剂卡；所述含有铕微球标记的抗氯霉素抗体的释放垫为将铕微球标记的抗氯霉素抗体溶液喷于释放垫上形成；所述铕微球标记的抗氯霉素抗体溶液的浓度为0.02mg/mL。所述抗氯霉素抗体为抗氯霉素单克隆抗体；所述抗氯霉素单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为1；所述抗氯霉素单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为2；所述氯霉素检测线T由氯霉素抗原或其溶液形成；或，所述氯霉素抗原溶液的包被浓度具体为0.3mg/ml；所述质控线C由IgG抗体或IgG抗体溶液形成；或，所述IgG抗体溶液的浓度具体为0.875mg/mL；所述含有氯霉素检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜为将所述氯霉素抗原溶液包被在硝酸纤维素膜形成检测线T，且将所述IgG抗体溶液包被在硝酸纤维素膜形成质控线C，得到含有氯霉素检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜。2CN110658342A权利要求书2/3页7.权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测氯霉素产品中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有氯霉素产品中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测待测样品中氯霉素含量产品中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在检测或辅助检测氯霉素中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在检测或辅助检测待测样品中是否含有氯霉素中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在检测或辅助检测待测样品中氯霉素含量中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡中的铕微球标记的抗氯霉素抗体在检测或辅助检测待测样品中是否含有氯霉素或待测样品中氯霉素含量中的应用。8.一种检测或辅助检测待测样品中是否含有氯霉素的方法，包