用于新型冠状病毒检测的引物探针组合、试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112226538A(43)申请公布日2021.01.15(21)申请号202011128983.9(22)申请日2020.10.21(71)申请人江苏默乐生物科技股份有限公司地址225300江苏省泰州市健康大道805号G116幢6F-7F东(72)发明人李杨霞王稀莹吕棠山贾俊玲(74)专利代理机构杭州华知专利事务所(普通合伙)33235代理人束晓前(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书2页说明书11页序列表6页附图1页(54)发明名称用于新型冠状病毒检测的引物探针组合、试剂盒及方法(57)摘要本发明提供了一种用于新型冠状病毒检测的引物探针组合、试剂盒及方法，引物探针组合包括用于扩增新型冠状病毒ORF1ab基因、E基因和N基因的引物及用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因、E基因和N基因的相应探针。该引物探针组合，以新型冠状病毒的ORF1ab基因、E基因和N基因作为检测靶标；在ORF1ab基因对新型冠状病毒保守性好的区段进行引物探针组合的设计，能够保证检测的特异性和准确性，同时也增加了E基因、N基因区段的引物探针设计，能够有效减少漏检的概率。本发明还通过加入人源内标的设计，能够对采样、提取和检测过程进行监测，防止因采样不合格、提取失败或者检测试剂失效而出现假阳性的结果。CN112226538ACN112226538A权利要求书1/2页1.一种用于新型冠状病毒检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括用于扩增新型冠状病毒ORF1ab基因的引物、用于扩增新型冠状病毒E基因的引物和用于扩增新型冠状病毒N基因的引物及用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的探针、用于检测新型冠状病毒E基因的探针和用于检测新型冠状病毒N基因的探针；所述用于扩增新型冠状病毒ORF1ab基因的引物包括正向引物ORF1ab-F和反向引物ORF1ab-R；所述正向引物ORF1ab-F的DNA序列如SEQIDNO:1所示，所述反向引物ORF1ab-R的DNA序列如SEQIDNO:2所示；所述用于扩增新型冠状病毒E基因的引物包括正向引物E-F和反向引物E-R；所述正向引物E-F的DNA序列如SEQIDNO:3所示，所述反向引物E-R的DNA序列如SEQIDNO:4所示；所述用于扩增新型冠状病毒N基因的引物包括正向引物N-F和反向引物N-R；所述正向引物N-F的DNA序列如SEQIDNO:5所示，所述反向引物N-R的DNA序列如SEQIDNO:6所示；所述用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列如SEQIDNO:7所示；所述用于检测新型冠状病毒E基因的探针序列如SEQIDNO:8所示；所述用于检测新型冠状病毒N基因的探针序列如SEQIDNO:9所示。2.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒检测的引物探针组合，其特征在于，所述用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的探针序列中，探针5’端添加荧光报告基团FAM，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-1；和/或所述用于检测新型冠状病毒E基因的探针序列中，探针5’端添加荧光报告基团ROX，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-2；和/或所述用于检测新型冠状病毒N基因的探针序列中，探针5’端添加荧光报告基团VIC，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-1。3.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合还包括用于扩增内标IC基因的引物及用于检测内标IC基因的探针；所述用于扩增内标IC基因的引物包括正向引物IC-F和反向引物IC-R，所述正向引物IC-F的DNA序列如SEQIDNO:10所示，所述反向引物IC-R的DNA序列如SEQIDNO:11所示；所述用于检测内标IC基因的探针序列如SEQIDNO:12所示。4.根据权利要求3所述的用于新型冠状病毒检测的引物探针组合，其特征在于，所述用于检测内标IC基因的探针序列中，探针5’端添加荧光报告基团CY5，3’端添加荧光猝灭基团BHQ-2。5.权利要求1～4任意一项所述的引物探针组合在制备新型冠状病毒检测试剂盒中的应用。6.一种新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括检测缓冲液、混合酶液、阳性质控品、阴性质控品以及权利要求1～4任意一项所述的新型冠状病毒检测引物探针组合。7.根据权利要求6所述的新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品包括含有新型冠状病毒ORF1ab基因片段、E基因片段、N基因片段及内标IC基因片段的假病毒颗粒或质粒；和/或所述阳性质控品包括从新型冠状病毒的ORF1ab基因、E基因、N基因中各选取的长度为2C