用于检测淋球菌的引物探针组合物、试剂盒及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114317785A(43)申请公布日2022.04.12(21)申请号202111602091.2(22)申请日2021.12.24(71)申请人苏州中科先进技术研究院有限公司地址215123江苏省苏州市工业园区兴浦路333号1幢201室(72)发明人张炳为周树民辜嘉(74)专利代理机构深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316代理人孟洁(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/36(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称用于检测淋球菌的引物探针组合物、试剂盒及方法(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，具体提供了用于检测淋球菌的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明提供的这种用于检测淋球菌的引物探针组合物可以快速扩增目的基因，设计的内标作为PCR扩增体系中的内控，能预防样本中可能存在的干扰物质导致的假阴性；本发明提供的以该引物探针组合物为主要成分的试剂盒及检测方法样本处理过程简单，对淋球菌核酸有很强的特异性，耗时短，能对生殖道分泌物等未知样本中淋球菌核酸进行准确检测，与可经性传播、易引起相同或相似临床症状的其他病原体无交叉反应，解决了现有技术中样本处理繁琐，特异性差等问题。并且，本试剂盒灵敏度高，检测限为200copies/ml，为诊断淋球菌提供可靠的实验依据。CN114317785ACN114317785A权利要求书1/1页1.一种用于检测淋球菌的引物探针组合物，包括目的基因引物探针组合物；其特征在于，所述目的基因引物探针组合物包括：目的基因上游引物，其序列为：ACGCTCCATATCGCTATGAAC；目的基因下游引物，其序列为：TATCTGTGGAGCTTGCTAGGTATA；目的基因探针，其序列为：CTATGACTATCAACCCTGCCGCC。2.如权利要求1所述的用于检测淋球菌的引物探针组合物，其特征在于，还包括内标引物探针组合物；所述内标引物探针组合物包括：内标上游引物，其序列为：TGACAATGTTGGCAAGACTGTTG；内标下游引物，其序列为：GCCGACAAACTGGGAATGAAC；内标探针，其序列为：TGGAGATCGTTTTGTGGCTTGTGA。3.如权利要求2所述的用于检测淋球菌的引物探针组合物，其特征在于，所述内标的序列为：TGACAATGTTGGCAAGACTGTTGATGGAGAGCCTTTTGTGGCTTGTGATTTTTGTTCATTCCCAGTTTGTCGGC。4.一种用于检测淋球菌的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液；所述PCR反应液包括权利要求1‑3任意一项所述的用于检测淋球菌的引物探针组合物。5.如权利要求4所述的用于检测淋球菌的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应液还包括10×PCR反应缓冲液、dNTP。6.如权利要求4所述的用于检测淋球菌的试剂盒，其特征在于：还包括核酸提取液；所述核酸提取液包括10‑50mM的Tris、0.1‑1M的NaCl、0.1‑1mM的EDTA、10‑50mM的NaOH、0.01‑0.5mM的莎梵婷、5％‑20％的Chelex‑100和0.01‑2％的十二烷基磺酸钠。7.如权利要求4所述的用于检测淋球菌的试剂盒，其特征在于：还包括核酸提取液；所述酶混合液包括5U/μl的DNA聚合酶和1U/μl热启动修饰抗体。8.如权利要求4所述的淋球菌检测试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为淋球菌强阳性样本；所述阴性对照为不含有淋球菌、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体的灭活阴性样本。9.一种用于检测淋球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样本的DNA；(2)以待测样本的DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，所述PCR反应体系包括权利要求1‑3任意一项所述的用于检测淋球菌的引物探针组合物；(3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。10.如权利要求9所述的用于检测淋球菌的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR反应程序为：95℃，3min；94℃，15sec，60℃，30sec，40个循环。2CN114317785A说明书1/5页用于检测淋球菌的引物探针组合物、试剂盒及方法技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于检测淋球菌的引物探针组合物、试剂盒及方法。背景技术[0002]淋球菌(Neisseriagonorrheae，NG)于1987年由Neisser发现，俗称淋病双球菌获淋球菌，是引起人类淋病的致病病原体，属于奈瑟菌属。淋球菌有严格的人类寄生性，对人体有较强的适应和侵袭能力，其主要致病物质包括菌毛