一种脐带间充质干细胞提取分离器及其提取方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115725392A(43)申请公布日2023.03.03(21)申请号202211674632.7C12M1/00(2006.01)(22)申请日2022.12.26C12M3/00(2010.01)C12N5/0775(2006.01)(71)申请人乐杰（海南）生物科技有限公司地址572000海南省三亚市崖州区崖州湾深海科技城综合服务中心A9栋1楼,2楼(72)发明人程乐杰赵栋炜郭馨怡王泊蔡虎(74)专利代理机构西安智典联合专利代理事务所(普通合伙)61299专利代理师张鹏(51)Int.Cl.C12M1/12(2006.01)C12M1/33(2006.01)C12M1/02(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图3页(54)发明名称一种脐带间充质干细胞提取分离器及其提取方法(57)摘要本发明提供一种脐带间充质干细胞提取分离器，包括分离筒和无菌过滤网，所述的分离筒的内侧下部放置有分离隔网，分离隔网与分离筒的内壁贴合，且分离筒的底部设置为漏斗状，分隔隔网的内侧设置为弧形凹槽；分离筒的上端焊接有限位环；分离筒的右侧焊接有侧边固定架，且侧边固定架上开设有螺栓孔；侧边固定架的上部左侧螺栓连接有分离气缸，且分离气缸与分离筒的中间位置垂直对应；分离气缸的下部螺栓安装有橡胶挤压头，且橡胶挤压头的下部设置为弧形；无菌过滤网放置在分离筒的内侧，同时无菌过滤网的上端套接在限位环的外侧。本发明在需要对分离隔网进行维护清洗时可利用钢丝挂钩挂接在分离隔网上进行清洗维护。CN115725392ACN115725392A权利要求书1/2页1.一种脐带间充质干细胞提取分离器，包括分离筒(1)和无菌过滤网(7)，其特征在于，所述的分离筒(1)的内侧下部放置有分离隔网(2)，分离隔网(2)与分离筒(1)的内壁贴合，且分离筒(1)的底部设置为漏斗状，分隔隔网(2)的内侧设置为弧形凹槽；分离筒(1)的上端焊接有限位环(3)；分离筒(1)的右侧焊接有侧边固定架(4)，且侧边固定架(4)上开设有螺栓孔；侧边固定架(4)的上部左侧螺栓连接有分离气缸(5)，且分离气缸(5)与分离筒(1)的中间位置垂直对应；分离气缸(5)的下部螺栓安装有橡胶挤压头(6)，且橡胶挤压头(6)的下部设置为弧形；无菌过滤网(7)放置在分离筒(1)的内侧，同时无菌过滤网(7)的上端套接在限位环(3)的外侧。2.一种脐带间充质干细胞的提取方法，其特征在于，该种脐带间充质干细胞的提取方法具体包括以下步骤：步骤一：对脐带采集，选取所需提取干细胞的脐带；步骤二：对脐带进行预处理；第一步：对脐带进行清洗，利用PBS磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗多遍，接着利用无菌过滤网对冲洗掉落的凝血进行过滤收集；第二步：将清洗的脐带切段，然后将脐带以8‑10厘米进行切断处理；第三步：对切段的起到进行消毒处理，将切断的脐带放入到酒精消毒液内浸泡，实现对脐带消毒处理；第四步：对消毒后的起到进行二次清洗，接着利用PBS磷酸缓冲盐溶液对脐带再次清洁后，将脐带表面的水分筛除；步骤三：对脐带粉碎过滤处理；第一步：将二次清洗后的起到粉碎处理，将清洁后的脐带放入到粉碎机内进行粉碎处理；第二步：将碎料放入离心管内，将粉碎的碎料放入到离心管内通过清洗液重悬清洗；第三步：对粉碎后的碎块内加入消化液和催化剂，接着向离心管内添加3‑5毫升催化剂和4‑26毫升的消化液，并保持在37‑39摄氏度温度范围内；第四步：对放入消化液和催化剂的碎料进行振荡处理，接着利用对添加催化剂和消化液的碎料进行振荡消化；步骤四：振荡完毕后利用无菌过滤网进行过滤处理，振荡消化后利用无菌过滤网对碎料和料液进行分离；步骤五：对滤液进行处理；第一步：向滤液内添加分离液，向料液内添加分离液，进行搅拌混合；第二步：对滤液进行离心分离然后取出上清液，搅拌混合后将上清液取出；第三步：加入间充质干细胞培养基后再次搅拌，再次添加间充质干细胞培养基后进行再次搅拌；第四步：再次离心后取出上清液并搅拌制成混悬液，再次搅拌完毕后将产生的上清液再次取出，从而能够制成混悬液；第五步：接种培养；步骤六：对培养基进行吸弃，接种培养后，吸弃全部培养基，并重新加入间充质干细胞培养基即可。2CN115725392A权利要求书2/2页3.如权利要求2所述的脐带间充质干细胞的提取方法，其特征在于，在步骤二中，所述的第一步中的PBS磷酸缓冲盐溶液对脐带冲洗次数可设置为5次。4.如权利要求2所述的脐带间充质干细胞的提取方法，其特征在于，在步骤二中，所述的第一步中的无菌过滤网采用100‑200目的无菌过滤网。5.如权利要求2所述的脐带间充质干细胞的提取方法，其特征在于，在步骤二中，所述的第二步中的脐带切断的长度可设置为9厘米。6.如权利要求2所述的脐带间充