促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102965421A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102965421A(43)申请公布日2013.03.13(21)申请号201210430702.4(22)申请日2012.11.02(71)申请人华南理工大学地址510640广东省广州市天河区五山路381号(72)发明人赵海锋赵谋明任娇艳赵强忠崔春(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人何淑珍(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C12N1/38(2006.01)C12R1/865(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书33页页附图附图22页(54)发明名称促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法与应用(57)摘要本发明公开了促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法与应用。制备方法以大豆分离蛋白为原料，用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶对其进行水解，离心收集大豆肽，过不同分子量截留的滤膜，获得不同分子量的大豆肽。本发明获得分子量在小于1ku大豆肽添加量为0.1~0.3%时能显著促进酵母生长，分子量在3~5ku大豆肽添加量为0.1~0.3%时能显著提高酵母的耐乙醇性能。CN1029654ACN102965421A权利要求书1/1页1.促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）大豆分离蛋白按1:15（w/v，g/mL）溶于水，80-90℃热处理10-30min；（2）添加适量木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶于50-55℃恒温酶解6~10h后，煮沸10-30min灭酶，酶解物6000g-10000g离心5-10min；（3）过不同分子量截留的滤膜，收集不同分子量段的大豆肽，冷冻干燥；不同分子量段的大豆肽包括：分子量小于1ku的大豆肽（SP1），分子量为1~3ku的大豆肽（SP2），分子量为3~5ku的大豆肽（SP3），分子量为5~10ku的大豆肽（SP4），以上各段大豆肽总含量占大豆分离蛋白质量70%以上。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（3）最终得到分子量小于1ku的大豆肽和分子量3~5ku的大豆肽，即所述生物活性肽。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）所述木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为底物蛋白的0.2-0.4%和0.4-0.6%（w/w）。4.权利要求1~3任一项所述制备方法制得的生物活性肽的应用，其特征是将生物活性肽添加至发酵液中。5.根据权利要求4所述的应用，其特征是分子量小于1ku的大豆肽添加量为发酵液质量0.1~0.3%；分子量3~5ku的大豆肽添加量为发酵液质量0.1~0.3%。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵液中的酵母为酿酒酵母（Saccharomycespastorianus）。2CN102965421A说明书1/3页促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及功能性生物活性肽技术领域，具体涉及促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方法与应用。背景技术[0002]近年来随着人们对肽的深入了解，发现有一部分肽对各类生物的功能性具有重要的调节作用，这部分肽被称为活性肽或功能性肽。目前，越来越多的研究开始关注活性肽对微生物的生理调控作用。据报道有一类天然肽具有抗菌作用，对革兰氏阳性菌有显著的抑菌效果。发现柞蚕抗菌肽能有效杀死革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌，但对一些革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌却无抑制作用。另外，活性肽对微生物生长和代谢的促进作用也多有报道。杨兰利用豆粕大曲培养过程中米曲霉产生的酶系对豆粕进行可控酶解获得分子量小于3ku的促发酵肽，可调控米曲霉的代谢，对酱油成曲蛋白酶的生成具有明显的诱导和提高作用。张清丽发现酪蛋白木瓜蛋白酶水解肽（分子量小于3ku）能有效的促进酸奶发酵并提高了酸奶的品质，经逐级分离纯化获得了三个（6肽或7肽）具有显著促乳酸菌生长活性的酪蛋白肽。[0003]大豆蛋白经微生物发酵或蛋白酶水解将大分子降解成小分子，形成低分子肽。大豆肽能促进微生物细胞的生长和代谢。大豆多肽可以促进乳酸菌、酵母菌、双歧杆菌和霉菌的增殖，并能促进面包酵母的产气作用。寡肽能促进瘤胃常驻菌群的繁殖。张容真等报道大豆水解蛋白对乳酸菌的增殖具有促进作用，认为添加1%的大豆水解蛋白能够使保加利亚乳杆菌的增殖速度提高将近一倍。赵冬梅等研究蛋白酶解大豆蛋白得到1.4ku分子量段以下的大豆肽对细菌和酵母菌的培养实验，发现对酵母细胞的生长具有显著的促进作用。因此运用大豆肽对酿酒酵母生理活性进行调控具有重要的应用价值。发明内容[0004]本发明目的是提供一种促酵母生长和提高酵母耐乙醇性能的生物活性肽的制备方