一种促进仔猪生长的生物活性肽及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105859839A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610347325.6A23K50/30(2016.01)(22)申请日2016.05.24C12R1/46(2006.01)C12R1/10(2006.01)(71)申请人湖北博大生物股份有限公司C12R1/07(2006.01)地址435000湖北省黄石市经济技术开发C12R1/72(2006.01)区鹏程大道79号(72)发明人孙国平吴正荣范博文陈义杰李亮(74)专利代理机构武汉河山金堂专利事务所(普通合伙)42212代理人胡清堂(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C12P39/00(2006.01)C12P21/02(2006.01)A23K20/147(2016.01)权利要求书2页说明书9页序列表1页(54)发明名称一种促进仔猪生长的生物活性肽及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种促进仔猪生长的生物活性肽，所述生物活性肽包含SEQIDNo.1所示氨基酸序列，该生物活性肽可明显提高仔猪对饲料中营养物质的吸收利用率，促进仔猪的生长发育，降低发病率，提高仔猪存活率。进一步的，提供了促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法及其在促进仔猪生长、降低仔猪死亡率中的应用，通过多种产酶益生菌的协同作用下产生促进仔猪生长发育的生物活性肽，应用于仔猪，促进机体合成代谢和脂肪分解，促使蛋白质合成，达到促进仔猪的生长，提高其生长速度的目的，通过调节内分泌系统的激素水平，发挥促进仔猪生长发育的作用，克服了激素残留的问题，达到健康绿色养殖的目的。CN105859839ACN105859839A权利要求书1/2页1.一种促进仔猪生长的生物活性肽，其特征在于：所述生物活性肽包含SEQIDNo.1所示氨基酸序列。2.权利要求1所述促进仔猪生长的生物活性肽在促进仔猪生长、降低仔猪死亡率中的应用。3.权利要求1所述促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A、分别筛选乳酸肠球菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产朊假丝酵母后培养；B、将步骤A所得乳酸肠球菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产朊假丝酵母混合培养发酵，提取发酵液上清液后浓缩、干燥，分离提纯后得生物活性肽。4.如权利要求3所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤A所述筛选包括如下步骤：a、初筛：将乳酸肠球菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产朊假丝酵母分别加入至酪蛋白分离筛选培养基的无菌平板上，紫外诱变培养后选取透明圈直径和菌落直径比大于1.5的菌落移种培养；b、复筛：将经过步骤a得到的各优势菌株进行微波诱变后，采用酪蛋白分离筛选培养基，30-34℃下恒温培养2-3天，选取透明圈直径和菌落直径比大于1.5的菌落移种培养；c、再复筛：将经过步骤b得到的各优势菌株分别与180-220μg/mL亚硝基胍溶液等体积混合后30-35℃下培养20-30min，终止反应后洗涤、配制为菌悬液，将菌悬液涂布于酪蛋白分离筛选培养基平板，35-39℃下培养34-38小时，选取透明圈直径和菌落直径比大于1.5的菌落。5.如权利要求4所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤b所述的微波诱变步骤包括：850W最大功率、额定微波频率2450MHz的微波炉里，微波辐照45-55s，且每隔5-10s冰浴处理，微波辐照结束后避光冷藏10-14小时。6.如权利要求3所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤A所述培养步骤包括：将筛选后的乳酸肠球菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产朊假丝酵母于牛肉膏蛋白胨培养基培养30-40小时，再转接至营养琼脂培养基中，于35-39℃下培养45-50小时。7.如权利要求3所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤B所述混合培养发酵步骤包括：以质量百分比计，乳酸肠球菌20-23％、地衣芽孢杆菌22-25％、凝结芽孢杆菌26-30％、短小芽孢杆菌10-14％、产朊假丝酵母14-17％的比例接种于同一装有液体培养基的发酵罐中培养发酵。8.如权利要求7所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：步骤B所述乳酸肠球菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产朊假丝酵母分别按8％-12％的接种量接种于种子液培养基中，培养驯化10-14小时后进行混合培养发酵。9.如权利要求7所述的促进仔猪生长的生物活性肽的制备方法，其特征在于：所述培养发酵的条件为pH7.2-7.4，搅拌转速180-220rpm，温度为35-39℃，通气量1:0.5-1:0.7，发酵时间22-24小时。10.如权利要求3所述的