赛庚啶半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104109112104109112A(43)申请公布日2014.10.22(21)申请号201310138339.3(22)申请日2013.04.19(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号(72)发明人何方洋冯才伟孙震陶光灿顾蓉蓉崔廷婷白莉齐向武(51)Int.Cl.C07D211/70(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/577(2006.01)权权利要求书2页利要求书2页说明书9页说明书9页附图3页附图3页(54)发明名称赛庚啶半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种赛庚啶半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。所述赛庚啶半抗原具有式（Ⅰ）所示分子结构；所述赛庚啶人工抗原具有式（Ⅱ）所示分子结构；采用本发明抗原得到的单克隆抗体的效价可达1:300000，半抑制浓度为0.20μg/L，产生的抗体的特异性高、灵敏度高、准确度高，本发明的抗原及抗体在食品中赛庚啶的残留检测上具有广泛的应用前景。CN104109112ACN10492ACN104109112A权利要求书1/2页1.一种赛庚啶半抗原，其特征在于具有式（Ⅰ）所示分子结构：2.一种权利要求1所述赛庚啶半抗原的制备方法，其特征在于是将去甲基赛庚啶和吡啶共溶于二甲基亚砜，40℃下滴入溴乙酸叔丁酯溶液，反应得到赛庚啶半抗原中间体，进而与甲酸反应得到所述赛庚啶半抗原（Ⅰ）。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将去甲基赛庚啶和吡啶共溶于二甲基亚砜，溴乙酸叔丁酯溶于二甲基亚砜；（2）40℃下将溴乙酸叔丁酯溶液缓慢滴入去甲基赛庚啶溶液中，继续反应，反应完毕后蒸除溶剂，通过柱层析分离得到赛庚啶半抗原中间体；（3）在步骤（2）制备得到的赛庚啶半抗原中间体中加入二甲基亚砜和甲酸，室温反应，反应完毕后蒸除溶剂，乙醇-水体系中重结晶得到目标半抗原。4.一种赛庚啶人工抗原，其特征在于具有式（Ⅱ）所示分子结构：5.一种权利要求4所述赛庚啶人工抗原的制备方法，其特征在于是采用活泼酯法将权利要求1所述的赛庚啶半抗原与蛋白质偶联制备得到。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）称取所述赛庚啶半抗原溶于N,N-二甲基甲酰胺；（2）取碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺用水充分溶解后加入到步骤（1）赛庚啶半抗原溶液中，活化反应；2CN104109112A权利要求书2/2页（3）将载体蛋白溶于CB溶液中，将步骤（2）活化反应后的溶液逐滴加入到载体蛋白溶液中，过夜；（4）将经步骤（3）反应后的溶液透析得到目的产物，分装后-20℃保存。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白。8.一种权利要求4所述人工抗原在制备赛庚啶抗体或在检测赛庚啶方面的应用。9.一种采用权利要求4所述人工抗原制备得到的赛庚啶单克隆抗体。10.一种权利要求9所述抗体在检测赛庚啶中的应用。3CN104109112A说明书1/9页赛庚啶半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于食品安全技术领域，具体涉及赛庚啶半抗原、人工抗原和抗体的制备方法及应用。背景技术[0002]赛庚啶（Cyproheptadine，分子式：C21H21N），又称二苯环庚啶，是一种抗组胺药，具有抗5-HT、阻断H1受体及抗胆碱作用，主要用于治疗荨麻疹、湿疹、接触性皮炎、皮肤瘙痒、过敏性鼻炎等过敏性疾病，也可用于改善患者的食欲。[0003]赛庚啶是一种人用处方药，但目前在国内某些饲料产品中发现添加，分析原因可能是通过促进动物食欲以达到增重的目的。食用含有赛庚啶残留的动物源性产品，对人体健康具有一定的危害性，对儿童的作用更为明显，高浓度可直接引发昏迷、呼吸急促、全身无力等中毒症状，严重者则直接导致儿童死亡。因此，根据欧盟指令2001/82的要求，赛庚啶禁止作为兽药在动物中使用；我国农业部也于2010年12月27日发布1519号公告，禁止在饲料和动物饮水中使用赛庚啶。[0004]目前对赛庚啶的研究主要集中在医药领域，仅有饲料中赛庚啶的检测标准方法，而动物尿液和动物组织中残留的相应检测方法研究报道较少，且多为仪器检测，存在复杂、繁琐、检测通量小、需要专业人员和专业技能、检测成本昂贵等缺陷，不能实现大批量样品的快速检测分析。因此，有必要研制更加简单快捷方便的检测方法。[0005]免疫