泰拉霉素半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113527390A(43)申请公布日2021.10.22(21)申请号202110749563.0G01N33/53(2006.01)(22)申请日2021.07.01(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号申请人北京望尔生物技术有限公司(72)发明人万宇平刘玉梅王兆芹马玉华龙光宗杨春艳(51)Int.Cl.C07H17/00(2006.01)C07H1/00(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K1/107(2006.01)C07K16/44(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称泰拉霉素半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了泰拉霉素半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用，本发明提供的泰拉霉素半抗原最大程度保留了泰拉霉素的特征结构，又引入马来酰亚胺基团，使得泰拉霉素半抗原的免疫原性明显增强；用泰拉霉素半抗原与载体蛋白偶联后得到的泰拉霉素人工抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经间接竞争酶联免疫法检测，泰拉霉素抗体对泰拉霉素的IC50为0.3μg/L，与其他大环内酯类抗生素的交叉反应率低，为后续建立泰拉霉素的各种免疫分析方法提供了基础。CN113527390ACN113527390A权利要求书1/1页1.一种泰拉霉素半抗原，其特征在于，其具有如下结构式：2.如权利要求1所述的泰拉霉素半抗原的制备方法，其特征在于，其是由泰拉霉素与N‑(p‑马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯反应得到。3.如权利要求2所述的泰拉霉素半抗原的制备方法，其特征在于，该制备方法为：取泰拉霉素加乙腈搅拌溶解，加三乙胺充分搅拌后，再加入N‑(p‑马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯，室温搅拌反应，然后进行分离纯化得到泰拉霉素半抗原；其中，所述泰拉霉素、N‑(p‑马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯的摩尔比为1:1。4.如权利要求2所述的泰拉霉素半抗原的制备方法，其特征在于，该制备方法的具体步骤如下：取泰拉霉素0.806g加乙腈50mL搅拌溶解，加三乙胺0.6mL充分搅拌后，再加入N‑(p‑马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯0.214g，室温搅拌反应2h，减压蒸干，得到黄色油状物，加乙醇10mL，重结晶，得到泰拉霉素半抗原。5.一种泰拉霉素人工抗原，其特征在于，其是载体蛋白和权利要求1所述的泰拉霉素半抗原偶联得到的偶联物。6.如权利要求5所述的泰拉霉素人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。7.如权利要求5或6所述的泰拉霉素人工抗原的制备方法，其特征在于，采用N‑琥珀酰‑3‑(2‑吡啶‑二硫)丙酸盐法将载体蛋白偶联于权利要求1所述泰拉霉素半抗原的马来酰亚胺基团上。8.一种泰拉霉素抗体，其特征在于，它是由权利要求5所述的泰拉霉素人工抗原经动物免疫得到，其能与泰拉霉素发生特异性免疫反应。9.一种权利要求8所述的泰拉霉素抗体在检测泰拉霉素残留中的应用。2CN113527390A说明书1/6页泰拉霉素半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域。更具体地，本发明涉及泰拉霉素半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]泰拉霉素(Tulathromycin)，又名土拉霉素，是一种新型的大环内酯类抗生素，其因药效高而逐渐取代了市场上广泛使用却已出现不同程度耐药性的其他大环内酯类药物，主要用于治疗由胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌和支原体等引起的家畜呼吸系统疾病。泰拉霉素给药后具有药物吸收迅速、半衰期长、生物利用度高等优点，我国农业部在2008年第957号公告中首次允许其在动物生产中使用。但有研究表明，随着用药时间的延长以及用药量的不断增大，泰拉霉素在动物性组织中会出现不同程序的药物残留，因此加强该药物的残留检测，对保障动物源性食品安全具有重要意义。[0003]目前，国内外针对泰拉霉素等大环内酯类药物残留分析检测方法主要有高效液相色谱法、高效液相色谱‑串联质谱法等，但都存在样品前处理繁琐、检测时间长、仪器贵重等缺点，在我国无法得到广泛应用，并且不符合现场检测“在短时间内低成本对大量样品进行准确检测和筛选”的要求。而免疫学检测分析技术以其高灵敏、特异性高、快速、操作简便等优点在药物残留检测领域已被广泛应用，比起仪器等检验方法有很多优势。所以免疫分析为泰拉霉素残留研究提供了一条新的分析检测方法。[0004]在建立免疫学检测方法并应用该检测方法检测泰拉霉素残留量时，关键技术在于能够获取到特异性强